|
Gomologik rekombinatsiyasiz gen inaktivatsiyasi.
Gomologik rekombinatsiya genning funktsiyasini o'rganish uchun uni buzishning yagona usuli emas. Muqobil variantlardan biri transpozon tegidan foydalanish bo'lib, bunda inaktivatsiyaga transpozitiv elementni genga kiritish orqali erishiladi. Aksariyat genomlarda transpozisiyalanuvchi elementlar mavjud (2.4.2-bo'lim) va ularning asosiy qismi faol bo'lmasa-da, odatda bir nechtasi ko'chirish qobiliyatini saqlab qoladi. Oddiy sharoitlarda transpozitsiya nisbatan kam uchraydigan hodisadir, lekin ba'zida tashqi stimulga javoban o'z pozitsiyasini o'zgartiradigan o'zgartirilgan transpozonlarni yaratish uchun rekombinant DNK usullaridan foydalanish mumkin. Buning bir usuli, xamirturush retrotranspozonini o'z ichiga oladi Ty1, 7.15-rasmda ko'rsatilgan.
Transpozon belgilari genetik iz deb ataladigan texnikaning markaziy qismidir (Smit va boshqalar., 1995), bu ko'plab xamirturushli etimlarni ularning funktsiyalarini baholashda birinchi qadam sifatida faolsizlantirish uchun ishlatilgan. Transpozon yorlig'i endogen yordamida meva-chivin genomini tahlil qilishda ham muhimdir Drosophila transpozon deb ataladi P element (Engels, 2000). Transpozon tegining zaif tomoni shundaki, individual genlarni nishonga olish qiyin, chunki transpozitsiya ko'proq yoki kamroq tasodifiy hodisadir va transpozon sakrab o'tgandan keyin qayerda tugashini oldindan aytib bo'lmaydi. Agar maqsad ma'lum bir genni inaktivatsiya qilish bo'lsa, unda ko'p sonli transpozitsiyalarni qo'zg'atish va natijada paydo bo'lgan organizmlarni to'g'ri kiritilganini topish uchun tekshirish kerak. Shuning uchun transpozon teglari genom funktsiyasining global tadqiqotlarida ko'proq qo'llaniladi, bunda genlar tasodifiy ravishda inaktivlanadi va naslni qiziqarli fenotip o'zgarishlarini tekshirish orqali aniqlangan o'xshash funktsiyalarga ega genlar guruhlari.
Gen inaktivatsiyasiga mutlaqo boshqacha yondashuv RNK aralashuvi bilan ta'minlanadi. Ushbu texnikada, genning o'zini buzish o'rniga, uning mRNKsi yo'q qilinadi. Bu hujayra ichiga ketma-ketligi nishonga olingan mRNKnikiga mos keladigan qisqa ikki zanjirli RNK molekulalarini kiritish orqali amalga oshiriladi. Ikki zanjirli RNKlar qisqaroq molekulalarga bo'linadi, bu esa mRNKning parchalanishiga olib keladi (7.16-rasm). Jarayon qurtda samarali ishlashi isbotlangan Caenorhabditis elegans (Olov va boshqalar., 1998), uning genomi to'liq ketma-ketlashtirilgan (2.1-jadvalga qarang) va yuqori eukaryotlar uchun muhim model organizm sifatida qaraladi (12.3.2-bo'lim). I xromosomasida bashorat qilingan 2769 gendan deyarli 2500 tasi C. elegans RNK aralashuvi bilan individual ravishda inaktivatsiya qilingan, shunchaki qurtlarni ikki zanjirli RNK o'z ichiga olgan eritma ichiga joylashtirish va molekulalarni hujayralarga o'tkazish uchun normal qabul qilish jarayonlarini ta'minlash orqali (Fraser) va boshqalar., 2000). Shu kabi loyihalar boshqasiga ham yo'naltirilmoqda C. elegans xromosomalari.
Ma'lumki, RNK interferensiyasi bir qator eukariotlarda tabiiy ravishda sodir bo'ladi, ammo uni sutemizuvchilar hujayralariga qo'llash qiyin bo'lishi kutilgan edi, chunki bu organizmlar ikki zanjirli RNKga parallel javob beradi, bunda oqsil sintezi odatda inhibe qilinadi va bu hujayra o'limiga olib keladi ( Bass, 2001). Biroq, bu xavotirlar asossiz edi, chunki hozirda ma'lum bo'lishicha, ikki zanjirli RNKlarni lipozomalar bilan sintez qilish orqali madaniyatli inson hujayralariga kiritish (7.17-rasm) maqsadli mRNKning inaktivatsiyasiga olib keladi va umumiy protein sintezida o'lchovli pasayish kuzatilmaydi (Elbashir). va boshqalar., 2001). Ushbu usulni sutemizuvchilar bilan qo'llashning kamchiliklari shundaki, u butun organizmlar bilan emas, balki faqat bitta hujayralar bilan ishlash mumkin, chunki ikki zanjirli RNKlar hujayra ichida cheklangan umrga ega va zarur bo'lgan doimiy o'zgarishlarni yaratish uchun foydalanilmaydi. nokaut sichqonlari qurilishida.
Do'stlaringiz bilan baham: |
