Hisoblashning ochiq ramkasini izlash

Genlar qayerda va qachon ifodalanganligini aniqlash uchun reportyor genlar va immunotsitokimyodan foydalanish mumkin.

Ko'pincha genning qayerda va qachon faol bo'lishini aniqlash orqali gen funktsiyasiga oid maslahatlarni olish mumkin. Agar gen ekspressiyasi ko'p hujayrali organizmning ma'lum bir organi yoki to'qimasi yoki organ yoki to'qima ichidagi hujayralarning bitta to'plami bilan chegaralangan bo'lsa, u holda bu pozitsion ma'lumot gen mahsulotining umumiy rolini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Xuddi shu narsa gen ifodalangan rivojlanish bosqichiga tegishli ma'lumotlarga ham tegishli. Ushbu turdagi tahlillar, ayniqsa, rivojlanishning dastlabki bosqichlarida ishtirok etgan genlarning faoliyatini tushunishda foydali bo'ldi. Drosophila (12.3.3-bo'lim) va sutemizuvchilar rivojlanishining genetikasini ochish uchun tobora ko'proq foydalanilmoqda. Bu, shuningdek, hayot aylanish jarayonida o'ziga xos rivojlanish bosqichlariga ega bo'lgan xamirturush kabi bir hujayrali organizmlarga ham tegishli.
Organizm ichidagi genlarni ifodalash modelini aniqlash muxbir gen yordamida mumkin. Bu ekspressiyasini qulay usulda kuzatish mumkin bo'lgan gendir, ideal holda vizual tekshirish (7.1-jadval), reportyor genini ifodalovchi hujayralar ko'k rangga aylanadi, floresan yoki boshqa ko'rinadigan signal beradi. Muxbir geni sinov geni qayerda va qachon ifodalanganligi haqida ishonchli ma'lumot berishi uchun muxbir sinov geni bilan bir xil tartibga soluvchi signallarga bo'ysunishi kerak. Bunga test genining ORF ni reportyor genning ORF bilan almashtirish orqali erishiladi (7.20-rasm). Gen ekspressiyasini boshqaradigan tartibga soluvchi signallarning aksariyati ORF ning yuqori oqimidagi DNK mintaqasida joylashgan, shuning uchun reportyor geni endi sinov geni bilan bir xil ifoda naqshini ko'rsatishi kerak. Shuning uchun ifoda namunasini reportyor signali uchun organizmni tekshirish orqali aniqlash mumkin.
Gen qaysi hujayralarda ifodalanganligini bilish bilan bir qatorda, gen tomonidan kodlangan oqsil topilgan hujayra ichidagi pozitsiyani aniqlash ham foydalidir. Masalan, gen funktsiyasiga oid asosiy ma'lumotlarni oqsil mahsuloti mitoxondriyada, yadroda yoki hujayra yuzasida joylashganligini ko'rsatish orqali olish mumkin. Bu erda muxbir genlari yordam bera olmaydi, chunki genning yuqori oqimidagi DNK ketma-ketligi - reportyor gen biriktirilgan ketma-ketlik - oqsil mahsulotini hujayra ichidagi to'g'ri joylashishiga yo'naltirishda ishtirok etmaydi. Buning o'rniga oqsilning aminokislotalar ketma-ketligi muhim ahamiyatga ega. Shuning uchun oqsilning qaerda joylashganligini aniqlashning yagona yo'li uni to'g'ridan-to'g'ri qidirishdir. Bu immunotsitokimyo orqali amalga oshiriladi, u qiziqish oqsiliga xos bo'lgan antikordan foydalanadi va shuning uchun bu protein bilan bog'lanadi va boshqa emas. Antikor shunday etiketlanadiki, uning hujayradagi o'rni va shuning uchun maqsadli oqsilning o'rnini ko'rish mumkin (7.21-rasm). Floresan markalash va yorug'lik mikroskopiyasi past aniqlikdagi tadqiqotlar uchun qo'llaniladi, yuqori aniqlikdagi immunotsitokimyoviy kolloid oltin kabi elektron zich yorliq yordamida elektron mikroskop yordamida amalga oshirilishi mumkin.