Biokimyo va molekulyar biologiya

27 – laboratoriya mashg`uloti

Nukleoproteidlar gidrolizi va gidroliz mahsulotlarini aniqlash
Nukleoproteidlar gidrolizi suyultirilgan sulfat kislota bilan qaynatilganda sodir bo‘ladi. Bu jarayonni quydagi sxema orqali tasvirlash mumkin:

Nukleoproteidlar

OQSIL NUKLEIN KISLOTALAR


Polipeptidlar Mononukleotidlar



Aminokislotalar Nukleozidlar Fosfat kislota
Purin Pentoza

va pirimidin

azot asoslari

Reaktiv va materiallar: 1) nukleoproteidlar cho‘kmasi (avvalgi ishga qaralsin ); 2) 5% sulfat kislota eritmasi; 3) konsentrlangan sulfat kislota; 4) 10% o‘yuvchi natriy eritmasi; 5) konsentirlangan ammiak (20-25%); 6) 1% mis sulfat; 6) 1% timolning spirtli eritmasi 7) kumush oksidining ammiakli eritmasi: 1-2% li kumush nitrat eritmasiga xosil bo‘lgan cho‘kma eriguncha konsentrlangan ammiak eritmasi qo‘shiladi; 8) molibden reaktivi: 3,75 g ammoniy molibdatini 50 ml suvda eritiladi va unga 32% nitrat kislota 50ml qo‘shiladi (Ro=1,2). Tuzning to‘liq erishi azot kislota qo‘shilgandan keyin sodir bo‘ladi.

Nukleoproteidlar cho‘kmasi dumaloqtagli kolbaga solinadi, 5% sulfat kislota bilan yuviladi. Hammasi bo‘lib 20-25ml eritma sarflanadi. Kolbani og‘zini probka bilan yopib teskiri muzlatgichga ulab, astbestli setkagaustiga qo‘yib past olovda qaynatiladi. Qaynatish 1-1,5 soat davom yetadi. So‘ng olingan gidrolizat sovutiladi va qog‘oz filtrdan filtrlab olinadi. Olingan filtrat bilan peptid bog‘lariga, purin asoslariga , pentozaga va fosfor kislotasiga hos bo‘lgan sifat reaksiyalari bajariladi.

Ilova: Nukleoproteidlarni proteolitik pachalanishini ularning achitqidan ajratmagan holda ham o‘tkazish mumkin. Buning uchun 1 g quruq achitqini dumaloq tagli kolbaga solib unga 30-40 ml 5% li sulfat kislota solinadi. Kolbani havo muzlatgichiga ulangan probka bilan yopamiz va past olovda 1-1,5 soat qaynatamiz. So‘ng kolbani sovutib gidrolizatni filtrlaymiz.