|
Оқсилларнинг бирламчи тузилишини аниқлаш усуллари
Оқсилларнинг бирламчи структураси аниқлашнинг энг муҳим усуллари
бири бу - Эдман усулидир.
Эдман (инглизча Edman degradation) усули пептидларнинг бирламчи
кетма-кетлигини (сиквенсини) аниқлашнинг энг дастлабки усулларидан
биридир. 1950-1956 йилларда швед биокимёгари Пер Виктор Эдман томонидан
таклиф қилинган. Усулнинг моҳияти ўрганилаётган пептидни маълум
реагентлар тўплами билан қайта ишлашдан иборат бўлиб, бу аминокислоталар
кетма-кетлигининг N-учидан битта аминокислота ажралишига олиб келади.
Реакциянинг циклик такрорланиши ва реакция маҳсулотларини таҳлил қилиш
пептиддаги аминокислоталарнинг кетма-кетлиги ҳақида маълумот беради.
ФИТЦ (фенилизотиоцианат) пептиддаги N-охири аминокислоталарни
аниқлаш учун ишлатиладиган реагентдир. У алфа аминокислоталар ва эркин
аминокислоталарнинг алфа карбоксил гуруҳи билан реаксияга киришади.
Полипептиднинг N-охири аминокислота билан ўзаро таъсири натижасида
фенилтиогидантоин ҳосиласи ҳосил бўлади. Бунда пептиддаги N-охири
аминокислотанинг алфа-карбоксил гуруҳи орасидаги боғланиш
беқарорлашади. Бу боғланиш бошқа пептид боғларига зарар етказмасдан
танлаб гидролизланади. Реакциядан сўнг, N-охири аминокислота билан ФИТЦ
комплекси ажратилади ва хроматография билан аниқланади. Кейин бу жараён
кесилган пептид билан такрорланади. Шу тарзда пептиддаги аминокислоталар
кетма-кетлиги аниқланади
Гель хроматография
Gel xromatografiyasi (jelni filtrlash) - bu o'zaro bog'liq bo'lgan uyali gellar orqali tahlil qilingan eritmani filtrlash orqali turli xil molekulyar og'irlikdagi moddalarning aralashmalarini ajratish usuli.
Moddalar aralashmasining ajralishi, agar bu moddalar molekulalarining o'lchamlari turlicha bo'lsa va jel donalarining g'ovak diametri doimiy bo'lsa va faqat o'lchamlari teshik teshiklari diametridan kichik bo'lgan molekulalar orqali o'tishi mumkin bo'lsa. jel. Tahlil qilinayotgan aralashmaning eritmasini filtrlashda jelning teshiklariga kirib boradigan kichikroq molekulalar ushbu teshiklar tarkibidagi erituvchida saqlanib qoladi va teshiklarga kira olmaydigan yirik molekulalarga qaraganda jel qatlami bo'ylab sekinroq harakatlanadi. Shunday qilib, gel xromatografiyasi ushbu moddalar zarralarining kattaligi va molekulyar og'irligiga qarab moddalar aralashmasini ajratishga imkon beradi. Ushbu ajratish usuli sodda, tezkor va eng muhimi, boshqa xromatografik usullarga qaraganda yumshoqroq sharoitda moddalarning aralashmalarini ajratish imkonini beradi.
Agar ustun jel granulalari bilan to'ldirilgan bo'lsa va keyin unga turli xil molekulyar og'irlikdagi turli xil moddalarning eritmasi quyilsa, u holda eritma ustundagi jel qatlami bo'ylab harakatlanganda, bu aralashma ajralib chiqadi.
Tajribaning boshlang'ich davri: tahlil qilingan aralashmaning eritmasini ustundagi jel qatlamiga qo'llash. Ikkinchi bosqich - gel kichik molekulalarning teshiklarga tarqalishiga xalaqit bermaydi, shu bilan birga katta molekulalar gel granulalarini o'rab turgan eritmada qoladi. Jel qatlami toza erituvchi bilan yuvilganda, katta molekulalar erituvchiga yaqin tezlik bilan harakatlana boshlaydi, kichik molekulalar avval jelning ichki teshiklaridan donalar orasidagi hajmgacha tarqalishi va natijada , ushlab turiladi va keyinchalik erituvchi tomonidan yuviladi. Moddalarning aralashmasi ularning molekulyar og'irligiga qarab ajratiladi. Moddalar molekula vaznining kamayishi tartibida kolonnadan yuviladi. Jel xromatografiyasini qo'llash.
Gel xromatografiyasining asosiy maqsadi - yuqori molekulyar og'irlikdagi aralashmalarni ajratish va polimerlarning molekulyar og'irlik taqsimotini aniqlash. Shu bilan birga, gel xromatografiyasi teng ravishda o'rtacha molekulyar og'irlikdagi va hatto past molekulyar og'irlikdagi moddalar aralashmalarini ajratish uchun ishlatiladi. Bunday holda, gel xromatografiya xona haroratida bo'linishga imkon berishi katta ahamiyatga ega, bu esa uni gaz-suyuqlik xromatografiyasidan yaxshi ajratib turadi, bu esa analitiklarni bug 'fazasiga o'tkazish uchun isitishni talab qiladi. Gel xromatografiyasi bilan moddalar aralashmasini ajratish, tahlil qilinayotgan moddalarning molekulyar og'irliklari juda yaqin yoki hatto teng bo'lganda ham mumkin. Bunday holda, eritilgan moddalarning jel bilan o'zaro ta'siri ishlatiladi. Ushbu o'zaro ta'sir shu qadar muhim bo'lishi mumkinki, u molekulyar kattalikdagi farqlarni bekor qiladi. Agar jel bilan o'zaro ta'sirning tabiati turli xil moddalar uchun bir xil bo'lmasa, bu farq qiziqish aralashmasini ajratish uchun ishlatilishi mumkin.
Do'stlaringiz bilan baham: |
