1 вариант Рибосома структураларини тадқиқот қилиш

Пептид занжиридаги N – ва C-охирги аминокислоталарни аниқлаш

N-охирги аминокислотани аниқлаш усуллари. Алоҳида кимёвий
жиҳатдан гомоген полипептид занжирининг бирламчи тузилишини аниқлаш
учун биринчи навбатда гидролиз усули ёрдамида унинг аминокислота таркиби
аниқланади, аниқроқ айтадиган бўлсак, гомоген полипептид намунасида 20 та
аминокислоталар нисбати аниқланади. Шундан сўнггина полипептид
занжирининг битта эркин NH2- ва битта эркин СООН- группаларини тутган
охирги аминокислоталар табиатини аниқлашга ўтилади. N-охирги
аминокислотани аниқлаш учун қатор усуллар таклиф этилган, жумладан
полипептидни 2,4-динитрофторбензол (ДНФБ) билан ариллаш усули
бўлган Сенгер усули қўлланилганда N-охирги аминокислотанинг сариқ
рангдаги 2,4-динитрофенил ҳосиласи олинади (Сенгер буйича секвенлаш,
лот. sequentum — кетма-кетлик). С-охирги аминокислотани аниқлаш усуллари. С-охирги
аминокислотанинг табиатини аниқлаш учун кўпинча ферментатив
усуллар қўлланилади. Полипептид занжирини карбоксипептидаза билан қайта
ишлаш унинг эркин СООН группаси бўлган тарафидан узилишига олиб
келади, узилган аминокислота хроматография йўли билан идентификация
қилинади.
Ферментатив усуллар – пептид боғларини уза олувчи протеолитик
ферментларнинг танловчанлигига асосланган. Жумладан пепсин ферменти фенилаланин, тирозин ва глутамин кислотаси, трипсин – аргинин ва лизин,
химотрипсин – триптофан, тирозин ва фенилаланин қолдиқлари ҳосил қилган
пептид боғларни уза олади. Қатор бошқа ферментлар, масалан, папаин,
субтилизин, проназа ва бошқа бактериал протеиназалар оқсилларни қисман
гидролиз қилишда ишлатилади. Натижада полипептид занжир баъзан бир
нечта аминокислоталардан иборат бўлган майда пептидларга ажралади.
Уларни бир-биридан электрофоретик ва хроматографик усуллар билан
ажратиб олиш мумкин, ва шу тарзда пептид карталарини тузиш мумкин
бўлади. Сўнгра ҳар бир ажратиб олинган пептиднинг аминокислота таркибини
ўрганиш мумкиндир. Бундай тадқиқот полипептиднинг тўлиқ аминокислота
кетма-кетлигини аниқлаш билан тугалланади.

5.