1-amaliy mashg’ulot hujayra va to’qima kulturasini olish usullarini o’zlashtirish Hujayra va to‘qimalar kulturasi

47-rasm PZR reaksiyasiga kerak bo’ladigan reaktivlar

48-rasm PZR jarayonida ishlatiladigan reaktivlar xarakati

Amplifikator

Amplifikatorda 2 tadan 382 ta yacheyka mavjud. Sig`imi 100mkl dan 10 mkl gacha.

50-rasm Amplifikator-real time

51-rasm PZR reaksiyasi

◦ PZR – issiq va sovuq haroratda kechadigan jarayonlarda harakatlanadi va bu jarayonlar device ya’ni amplifikatorlarda amalga oshiriladi. Bu usul asosiy 3ta bosqichdan iborat bo’lib;

• 
  1.Replikatsiya (denaturatsiya)
  
• 
  2.Annealing (odjik)
  
• 
  3.Extending (elongatsiya)
  

1. Replikatsiya-Bosqichda yuqori tempratura natijsida DNK qo’sh zanjiri asosining o’rtasidagi vodorod bog’lar uziladi va 2 ta alohida bog’ga ajraladi. Bu bosqichda 94-96 ℃ tempratura beriladi. A va T bor joylari 80 ℃ dan o’tgandan so’ng ochilishni boshlaydi ( 2 H bog’) G va S bor joylari esa 96 ℃ da butunlay ajraladi ( 3ta H bog’) DNK 2 ta alohida zanjirida DNK ning yangi bog’lari sintezlanadi. Bu bosqich odatda 15-30 sekund oralig’ida kechadi
2.Annealing (odjik)- Bosqichda tempratura pasayadi DNK primerlar DNK zanjiriga borib qo’shilish imkonini beradi. Bu reaksiyada tempratura 50 -65 ℃ da bo’ladi. Bunda primerlar vodorod bog’lari orqali DNK ning yolg’iz zanjirining har yeriga borib joylashadi. Primerlar yangi DNK zanjirining qisqa sohalarida ketma – ket bir birini to’ldirgan holda hosil qiladi. DNK ni 2 ga ajralgani yangi DNK zanjiri hosil bo’lishida matrisa vazifasini o’taydi. Bunda 2 ta primer hosil bo’lib 1 si ’’forward’’ oldinga, 2 si ’’reverse’’ tekari tomonga harakatlanib sintezlaydi. Bu bosqich 10-30 sekund davom etadi.
3.Extending (elongatsiya)- Bosqichda tempratura 72 ℃ ko’tariladi va DNK yangi bog’lari TAQ polymerase fermenti tomonidan sitezlanadi va natijada yangi qo’shspiral DNK malekulasi vujudga keladi. Bunda TAQ polymerase primerlarga hujum qilib so’ngra DNK asosi birin ketin sintezlanadi. Bu bosqich o’rtacha 7 min davom etadi. 1 daqiqada o’rtacha 1000 ta DNK nusxasi vujudga keladi.