Ўзбекистон республикаси олий мажлис сенати аграр, сув хўжалиги масалалари ва экология



Download 7,25 Mb.
Pdf ko'rish
bet190/368
Sana30.04.2022
Hajmi7,25 Mb.
#598631
1   ...   186   187   188   189   190   191   192   193   ...   368
Bog'liq
1 Toplam Senat 2018

 
 


196 
СОЗДАНИЕ ВЕКТОРНОЙ КОНСТРУКЦИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ 
БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛИНИЙ ХЛОПЧАТНИКА УСТОЙЧИВЫХ К ФУЗАРИОЗНОМУ 
ВИЛТУ 
FUSARIUM OXYSPORUM F.SP. VASINFECTUM

 
Т.М.Норов, З.Т.Буриев, И.Ю.Абдурахмонов 
ЦЕНТР 
Центр Геномики и биоинформатики АН РУз
 
Развитие биотехнологии позволило развитым странам быстрыми темпами создать новые сорта 
сельхозкультур с улучшенными свойствами. Таким путем ученым удалось получить трансгенные сорта 
хлопчатника устойчивых к насекомым, гербицидам и грибам. Данные технологии оказались 
эффективными в создании новых улучшенных сортов растений. Особо следует отметить в этом плане 
технологию РНК интерференции (RNAi), которая появилась относительно недавно и является наиболее 
эффективной методикой для получения трансгенных растений. 
Технология РНК интерференции основана на пост транскрипционном подавлении функции гена. 
Специфическая РНК интерференция (RNAi) – деградация мРНК генов растений с использованием 
конструкций, кодирующих шпилечные дуплексы РНК, эффективно используется в функциональной 
геномике нематоды 
Caenorhabditis elegans 
и в настоящее время широко применяется на растених. Данная 
технология позволяет точнее и эффективнее нокаутировать желаемый ген и получить, соответственно, 
необходимый фенотип. На сегодняшний день существуют различные RNAi векторные системы, которые 
можно применять в исследованиях, и они широкодоступны на мировом рынке. Однако при желании 
использовать их для производства новых сортов и линий растений необходимо иметь разрешения этих 
компаний. 
Хлопчатник является одной из лидирующих в мире товарных культур, приносящих в бюджет 
хлопкосеющих стран огромную прибыль. Поэтому селекционные программы этих стран, в том числе и 
Узбекистана, направлены на создание новых и высококачественных сортов хлопчатника, устойчивых к 
различным биотическим и абиотическим факторам окружающей среды. Несмотря на эти старания 
селекционеров ежегодно на полях из-за патогенов теряются огромные площади посевов хлопчатника. 
Одним из таких патогенов является 
Fusarium oxysporum
f.sp. 
vasinfectum
(FOV), который вызывает вилт 
хлопчатника [1]. В настоящее время в США угроза распространения FOV имеет первостепенное значение, 
так как на хлопковых полях Калифорнии была обнаружена новая высокопатогенная 4-я раса FOV [2]. Все 
это указывает на необходимость ускорения создания новых устойчивых к вилту сортов хлопчатника. 
Группа ученых смогла получить генно-модифицированные линии хлопчатника, устойчивы к 
насекомым, путем введения в геном хлопчатника RNAi векторную конструкцию содержащей 
двухцепочечный РНК-дуплекс, соответствующий гену фермента монооксигеназы Р450 насекомого [3]. 
Целью данной работы является создание RNAi векторной конструкции для гена 
FoSTUA
гриба, 
позволяющая подавлять экспрессию этого гена в растительных клетках и способствующая устойчивости 
хлопчатника к фузариозному вилту (
Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum
). 
В рамках данного исследования учеными Центра были исследованы несколько генов 
Fusarium 
oxysporum
(FOV), которые играют важную роль в онтогенезе данного патогена. Одним из таких генов, 
является ген 
FoSTUA
, регулирующий образование микро и макро-конидий фузариозного гриба [4]. Этот 
ген был уже секвенирован в нашей лаборатории из генома местной расы гриба FOV.
Образцы геномной ДНК выделяются из гриба 
Fusarium oxysporum
f.sp. 
vasinfectum
. Реакция ПЦР 
проводится с использованием геномной ДНК в концентрации 50 нг. Для клонирования полученных ПЦР - 
продуктов используют ТОРО ТА клонирующий вектор pCR4-ТОРО и ТОР10 клетки 
Esherihia coli
(Фирма 
«Invitrogen», США). Эксперименты по клонированию и трансформации проводят в соответствии с 
инструкциями производителя. Клоны E. сoli, выращенные на среде LB с добавлением канамицина в 
концентрации 50мкг/мл в течение суток, отбирают для получения ПЦР - продуктов путем амплификации 
рекомбинантных плазмид из ТОРО ТА клонов 
E. coli
. Рекомбинантные плазмиды выделяют с помощью 
набора «Miniprep» (Фирма «Invitrogen», США). Секвенирование вставок плазмиды проводят с помощью 
реакционной смеси Big Dye терминатора на оборудовании ABI 3130xl (Фирма «Applied Biosystems», 
США). Полученные данные анализируют с помощью компьютерной программы SEQUENCHER 4.0 
(США). Для выравнивания нуклеотидных последовательностей используют компьютерную программу 
«CLUSTALX». 
Данные о геномной последовательности
 
гена 
FoSTUA
анализируются в базе данных «Gene Bank» 
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Последовательности обработаны с помощью компьютерной программы 
SEQUENCHER 4.0 (США). Были созданы несколко праймеров для секвенирования гена 
FoSTUA
гриба 
Fusarium oxysporum
f.sp. 
vasinfectum
. Используя праймерные пары созданные для гена 
FoSTUA
нами была 
осуществлена амплификация, клонирование и секвенирование.
Для создания генетической конструкции использована бинарная векторная система pART27 и 
регион гена 
FoSTUA
. Бинарные плазмиды pART27 разрезаются рестрикционными ферментами XhoI 


197 
(GGT) и XbaI (СТAGA) («Fermentas», Lithuania). Для фракцирования разрезанных плазмид 
осуществляется электрофорез в агарозном геле. Для очищение фрагментов плазмид из агорозной гели 
использовали метод фенол/хлороформа. Для связывания разрезанной плазмиды pART-27 с синтетическим 
дуплексам гена 
FoSTUA
используется метод лигазы.
Таким образам была создана RNAi векторной конструкции для гена 
FoSTUA
гриба, позволяющая 
подавлять экспрессию этого гена в растительных клетках и способствующая устойчивости хлопчатника к 
фузариозному вилту (
Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum
).

Download 7,25 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   186   187   188   189   190   191   192   193   ...   368




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish