Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Ход работы: 
1. 
 
Сжигание.
 
В колбу Кьельдаля помещают
 
1 мл мочи,
 
разве­
 
денной в 10 раз, добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты. 
Одновременно готовят контрольную пробу, заменив мочу на дистиллиро-
ванную воду. Обе колбы ставят в вытяжном шкафу в наклонном положении 
на песчаную баню. Содержимое колб нагревают в течение 40–60 минут, 
охлаж-дают, приливают по 1–2 капли пероксида водорода и сжигают до 
обесцвечива-ния реакционной­ смеси. 
Минерализат сливают после охлаждения в мерный цилиндр, споласкивая 
колбу два раза по 3 мл дистиллированной водой, затем доводят 
дистиллирован­ ной водой в цилиндре до объема 10 мл. Получают 
минерализованную мочу, разведенную в 100 раз. 
2. Фотоколориметрирование. В мерный цилиндр помещают 1 мл минера-
лизованной мочи, приливают 10 мл дистиллированной воды, перемешивают и, 
используя лакмусовую бумагу, прибавляют по каплям 40 % раствор гидроксида 
натрия до тех пор, пока лакмус не станет приобретать синеватый оттенок. За-тем 
добавляют дистиллированную воду до 14 мл (в мерном цилиндре) и при-ливают 
1 мл реактива Несслера. Необходимо строго соблюдать порядок прили-вания, 
тщательно перемешивая жидкость стеклянной палочкой. Одновременно таким же 
образом готовят контрольную пробу. 
Появляется желто-оранжевое окрашивание, после чего сразу проводят ко-
лориметрирование при синем светофильтре. 
3. Построение калибровочной кривой. Пока идет сжигание, необходимо 
приготовить­ серию стандартных рабочих растворов сульфата аммония 
с
содержанием­ 0,01; 0,02; 0,05; 0,10; 0,16; 0,20 мг азота в 1 мл. 
К
1 мл каждого стандартного раствора в мерном цилиндре приливают 13 мл 
дистиллированной воды и по 1 мл реактива Несслера при помешивании и фото-
метрируют. Находят показания оптической плотности при синем светофильтре 
49 

---

для каждого стандартного раствора. Затем приступают к построению графика, 
откладывая­ на оси ординат оптическую плотность, а на оси абсцисс — кон-
центрацию азота. Через полученные точки проводят прямую линию, которая 
изображает зависимость­ оптической плотности от концентрации азота. 
4. Расчет. Найдя разницу между значениями оптической плотности в 
опыт­ ной и контрольной пробах и, откладывая ее на калибровочной кривой, 
опреде­ ляют содержание азота в 1 мл исследуемой мочи: 
Содержание общего азота в суточной моче, г / сут. =
=