Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Работа 11. Гидролиз казеина при участии трипсина 
Трипсин — фермент, относящийся к классу гидролаз, подклассу пептид-
пептидгидролаз (эндопептидаз), подподклассу сериновые протеиназы. Стро-
ение трипсина хорошо изучено. Это белок с относительной молекулярной 
массой, равной 23 950, состоит из 228 аминокислотных остатков. Первичная 
структура трипсина полностью выяснена, также многое известно о вторичной 
и третичной структурах. В активный центр трипсина входят аминокислоты: 
серин-183 остаток, гистидин-29 остаток. Благодаря сочетанию перечисленных 
аминокислот в молекуле трипсина и осуществляется гидролиз пептидных свя-
зей после аргинина и лизина: ала–фен–лиз–вал–арг–глу–гли + Н
2
О → ала–
фен– лиз + вал–арг + глу–гли. 
Степень распада белка при действии на него трипсина можно проследить 
по увеличению количества α-аминогрупп, освобождающихся при гидро-лизе 
пептидных­ связей белка. Чем больше освободилось α-аминных групп, тем 
больше, соответственно, распалось пептидных связей и тем выше, следо-
вательно, степень­ деструкции белковой молекулы. 
Реактивы и оборудование: 
Раствор казеина (10 мг в 1 мл): навеску казеина растворяют в небольшой 
порции 0,1 % раствора карбоната натрия при осторожном нагревании, раз­ 
бавляют дистиллированной водой и осторожно нейтрализуют 0,1 н. раство­ 
ром соляной кислоты; раствор трипсина 0,25 мг в 1 мл; 0,2 М трис-буфер 
(рН 8,0): смешивают 50 мл 0,4 н. раствора триоксиметиламинометана с 
26,8 мл 0,4
н. раствора соляной кислоты и доводят до 100 мл дистиллирован- 
45 

---

ной водой; нингидрин (3 %); изопропиловый спирт (50 %); ацетатный буфер (pH 
5,4): 270 г ацетата натрия растворяют в 200 мл дистиллированной воды­ и 
добавляют 50 мл перегнанной уксусной кислоты и доводят объем до 750 мл 
дистиллированной водой. ФЭК, термостат, пробирки, штативы для проби-
рок, пипетки на 1 и 5 мл.