Структура и функции белков и пептидов

Анализ гомологичных белков 
Гомологичные белки — белки, которые выполняют одну и ту же функцию, но разли-
чаются по первичной структуре (например, локализованы в различных органах или образу-
ются при патологических состояниях). Например, HbA (содержит Glu) 

HbS (содержит 
Val) при серповидноклеточной анемии. 
Метод
пептидных карт (отпечатков пальцев),
 
предложенный Ингремом
 
Этапы: 
1)
оба анализируемых белка расщепляют на фрагменты (пептиды); 

---

16 
2)
смесь пептидов каждого белка наносят в виде пятна на угол листа хроматографи-
ческой бумаги; 
3)
проводят электрофорез в горизонтальном направлении; 
4)
проводят распределительную хроматографию в вертикальном направлении; 
5)
полученные карты окрашивают и сравнивают; 
6)
различающиеся пептидные пятна выделяют и анализируют их аминокислотный 
состав.
Таким образом, использование пептидных карт позволяет анализировать не всю моле-
кулу белка, а только те фрагменты, которые различаются между собой. 
 
 
УСТАНОВЛЕНИЕ АК-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА 
I. Определение N-концевой АК 
1. Метод Сэнджера. Белок обрабатывают динитрофторбензолом (ДНФБ). При этом с 
данным реагентом взаимодействует только N-концевая АК. Далее проводят полный гидро-
лиз белка до аминокислот. Концевая АК, связанная с ДНФБ, после реакции окрашена в жел-
тый цвет. Далее проводят идентификацию методом тонкослойной хроматографии в присут-
ствии эталонов — ДНФБ-производных аминокислот, и устанавливают АК, которая связа-
лась с ДНФБ в исходном белке. 
2. Взаимодействие N-концевой АК с дансилхлоридом с образованием флуоресциру-
ющего соединения. Дальнейший гидролиз и контроль методом тонкослойной хроматографии 
в присутствии эталонов позволяют выявить N-концевую АК.
3. Метод Эдмана. В данном методе используется фенилизотиоцианат (ФИТЦ), кото-
рый также связывается с N-концевой АК с образованием соединения оранжевого цвета. При 
этом полный гидролиз белка проводить не нужно, в специально подобранных условиях про-
исходит отщепление только N-концевой АК, которую далее идентифицируют. 
4. Ферментативный метод с использованием аминопептидаз — специальных фермен-
тов, которые избирательно отщепляют N-концевые АК, например, аланиновая аминопепти-
даза.