Сифат анализи усулларининг синфланиши

5. Mavzu: Yupqa qatlamli xromatografiya usuli.
Qog’oz xromotografiyasi

Reja:
1.Yupqa qatlamli xromatografiya usulining moxiyati.
2.Yupqa qatlamli xromatografiya usulining ishlash prinspi.
3. Qog’oz xromotografiyasi usulining moxiyati.
4. Yupqa qatlamli xromatografiya usulining ishlash prinspi.

Yupqa qatlamli xromatografiya

Qora siyohning yupqa qatlamli xromatogrammasi
Yupqa qatlamli xromatografiya - bu xromatografik usul bo'lib, unda yupqa qatlam adsorbent statsionar faza sifatida ishlatiladi . Usul ajratilishi kerak bo'lgan moddalar sorbsion qatlam va undan oqib o'tadigan elyuent o'rtasida turlicha taqsimlanishiga asoslanadi, buning natijasida bu moddalar qatlam bo'ylab bir vaqtning o'zida siljish masofasi o'zgaradi. Yupqa qatlamli xromatografiya moddalarni tahlil qilish va ajratish uchun katta imkoniyatlar yaratadi, chunki sorbent ham, eluent ham keng diapazonda farq qilishi mumkin. Turli sorbentlarga ega bo'lgan plitalar sotuvda mavjud bo'lib, bu usulni tez va muntazam ravishda ishlatish imkonini beradi. Yupqa qatlamli xromatografiyaning o'zgarishi yanada ishonchli va takrorlanishi mumkin.yuqori samarali nozik qatlamli xromatografiya , bu maxsus plitalar va murakkab uskunalardan foydalanadi.
Yupqa qatlamli xromatografiya 1889 yilda kashf etilgan bo'lib, 20-asrning o'rtalarida sezilarli darajada rivojlangan va hali ham farmatsevtika, tibbiyot, oziq-ovqat sohalarida, shuningdek, akademik va sanoat fanlarida keng qo'llaniladi.
Usulni yaratishning zaruriy sharti 1861 yilda Schönbein tomonidan qog'oz xromatografiyasidan foydalanish edi ^[1] . Bu usul XIX asrning 80-yillarida Schönbein shogirdi Goppelsreder asarlarida ishlab chiqilgan ^[2] . O'sha paytdagi texnika kapillyar tahlil deb nomlangan. Ish deyarli unutilgan va 1944 yilda tsellyuloza xromatografiyasi Consden va boshqalar tomonidan qayta kashf etilgan.Yupqa qatlamli xromatografiya usuli, deyarli hozir ma'lum bo'lgan shaklda, birinchi marta 1889 yilda golland biologi Martin Beyjerink tomonidan qo'llanilgan. Jelatindagi sulfat va xlorid kislotalarning tarqalishini o'rganish, Beyjerink xlorid kislota sulfat kislotadan tezroq harakat qilishini aniqladi. U o'z tajribalarida qatlamga kumush xlorid eritmasini qo'shib xlorid kislota zonasini, bariy xlorid eritmasini qo'shib sulfat kislota zonasini aniqladi . 1898 yilda Wijsman solod diastazasida fermentlarni aniqlash uchun xuddi shunday usulni qo'lladi va birinchi bo'lib floresan aniqlashni qo'lladi; o'sha paytdagi usulning sezgirligi 40 pg miqdorida moddaning mavjudligini aniqlashga imkon berdi ^[3] . Shunga qaramay , 20-asr boshlarida M.S.Tsvet tomonidan ishlab chiqilgan ustun xromatografiyasi ham, yupqa qatlamli xromatografiya ham 1930-yillargacha amalda qoʻllanilmagan^4] .
1938 yilda Izmailov va Shrayber shisha plastinkaga yotqizilgan alyuminiy oksidi qatlamida dumaloq xromatografiya o'tkazganliklari haqida xabar berishdi. Bunda ajratilgan moddalar qatlamlari konsentrik doiralar shaklini oldi. Tadqiqotchilar bu usuldan sorbentlar va eluentlarni ustun xromatografiyasi uchun sinashda foydalanish mumkinligini ko‘rsatdi ^[3] .
TLC usulini ishlab chiqishda sezilarli yutuqlarga J.Kirshner va hamkasblari erishdilar, ular 1945-1954 yillarda sitrus mevalaridan xromatografik usullar bilan hidli moddalarni ajratib olish ustida ishladilar. Qog'oz xromatografiyasining o'z maqsadlari uchun qo'llanilmasligiga ishonch hosil qilgan holda , ular qog'oz va ustunli xromatografiyaning afzalliklarini birlashtirgan usulni ishlab chiqdilar, ammo Desaga va Merk ^[3] tomonidan reklama qilinmaguncha u ko'p e'tiborni jalb qilmadi .
1950-yillarning oʻrtalarigacha usulni tavsiflash uchun “tasma xromatografiyasi”, “plastinkali xromatografiya”, “yupqa plyonkali xromatografiya”, “ochiq ustunli xromatografiya” atamalari ishlatilgan boʻlsa, “ingichka qatlamli xromatografiya” atamasi E. 1956 yilda Stahl ^[5] shu qadar muvaffaqiyatli bo'ldiki, u boshqalarni siqib chiqardi. Taxminan bir vaqtning o'zida nufuzli Chemical Abstracts jurnali ushbu mavzu bo'yicha nashrlarni alohida indeks sifatida ajratib, uni analitik kimyoning mustaqil usuli sifatida tan oldi ^[3] .
Statsionar faza 
Qo'llaniladigan adsorbsion qatlamli plitalar 1961 yilda sotuvda paydo bo'lgan va hozirda uyda ishlab chiqarilgan plitalar deyarli foydalanishdan chiqarib yuborilgan. Zarrachalar hajmi 10-20 mkm bo'lgan sorbentlar odatda shisha , plastmassa yoki alyuminiydan tayyorlangan substratga qo'llaniladi. Qatlamning qalinligi 100-250 mkm (analitik plitalar uchun) dan 2 mm gacha (preparativ plitalar uchun). Standart plastinka formati 20x20 sm, lekin 10x20, 5x20 va 2,5x5 sm formatlari ham mavjud.Siz kerakli o'lchamdagi plastinkani o'zingiz kesishingiz mumkin. Plitalar, shuningdek, namunani qo'llashni osonlashtirish va namunani aralashtirishni oldini olish uchun kanallar bilan ham mavjud. Oldindan yutish qatlami bo'lgan plitalar pastroq adsorbsion quvvatga ega bo'lgan materialdan ( tsellyuloza ,diatomli er ). Bunday qatlamlar namunani tozalashga xizmat qiladi, shuningdek namuna ajratuvchi qatlamga yetib borgunga qadar tor chiziq hosil qiladi ^[6] .
TLC yuqori o'tkazuvchanligi uchun plitalar 1975 yilda taklif qilingan va o'lchamlari 10 × 20 va 10 × 10 sm, adsorbsion qatlam qalinligi 200 mkm. Bunday plitalarning ruxsati oshdi, aniqlash chegarasi past va elutsiya uchun kamroq erituvchi kerak. 1995 yilda takomillashtirilgan yuqori samarali sferik zarracha plitalari paydo bo'ldi. 2001 yilda bozorda monolit qatlamli plitalar taklif qilindi, ular faqat ilmiy tadqiqotlarda qo'llanildi ^[6] .
Adsorbentlar sifatida tarixan bir nechta materiallar ishlatilgan: alumina (kislotali, neytral va asosiy), kizelgur (tozalangan diatomli tuproq), poliamidlar , kation almashinadigan qatronlar . Bu materiallar bugungi kunda ham darslik va ilmiy maqolalarda tilga olinadi, lekin ular o‘z ahamiyatini yo‘qotib, ishlab chiqarish asosan to‘xtab qolgan ^[6] .
Plitalarni mustahkamlash uchun biriktiruvchi vositadan foydalanish mumkin. Ilgari, bu maqsadlar uchun, masalan, silika jeli G bo'lgan plitalarda, gips 13 massa foizi miqdorida keng qo'llanilgan . Bugungi kunda tijoratda mavjud bo'lgan yozuvlar organik bog'lovchilardan (masalan, metakrilatlardan) foydalanadi. Kraxmal va karboksimetil tsellyuloza foydalanish ham adabiyotda tasvirlangan . Aslida, bog'lovchi statsionar fazaning tarkibiy qismidir, shuning uchun turli bog'lovchilardan foydalanish turli xil xromatografiya natijalariga olib kelishi mumkin ^[6] .
Moddalar zonalarining joylashuvini aniqlashni qulayroq qilish uchun adsorbsion qatlamga floresan indikatorni kiritish mumkin. Bunday qatlam to'lqin uzunligi 254 nm bo'lgan ultrabinafsha nurlanish bilan nurlantirilganda , u yashil (F ₂₅₄ ) yoki och ko'k (F _{254 s} ) porlashni beradi. Bunday holda, ultrabinafsha nurni yutuvchi moddaning zonasi floresan qatlam fonida qorong'i ko'rinadi ^[6] .