Сборник содержит материалы научной мультиконференции «Биотех- нология медицине будущего»

Разработка технологий для получения аутологичных
кожных эквивалентов и кожных дериватов
Рябинин А.А., Калабушева Е.П., Воротеляк Е.А.
Институт биологии развития РАН им. Н.К. Кольцова, Москва, Россия
В настоящее время актуальной проблемой является разработка технологий выра-
щивания и пересадки живых эквивалентов кожи (ЖЭК), которые применяются для 
лечения ожогов, хронических воспалений и иных повреждений покровных тканей.
В перспективе, использование генетически модифицированных аутологичных клеток 
эпидермиса и дермы позволит формировать 
in vitro
ЖЭК, пригодные для замести-
тельной терапии пациентов с генетическими заболеваниями кожи. Одним из перспек-
тивных источников клеток для получения ЖЭК является дифференцировка индуци-
рованных плюрипотентных стволовых (ИПСК). К основным нерешенным проблемам 
данной технологии относятся отличие в структуре ЖЭК и его естественного аналога 
и отсутствие в нем кожных дериватов, участвующих в регуляции и самоподдержании 
кожного покрова.
Целью нашей работы было получение в ходе направленной дифференцировки 
ИПСК и верификация клеточных линий, пригодных для получения аутологичного 
ЖЭК и генерации кожных дериватов (волосяных фолликулов) 
in vitro
. Полученные
в ходе дифференцировки клеточные линии, аналог кератиноцитов (ИПСК-Кц) и аналог 
клеток дермальной папиллы волосяного фолликула (ИПСК-ДП) верифицировали при 
помощи иммуноцитохимического и количественного ПЦР выявления маркеров керати-
ноцитов (p63, К14, К18, К10 и др.) и маркеров клеток дермальной папиллы (версикана, 
виментина, фибронектина, гладкомышечного актина и др.) соответственно. Также для 
верификации ИПСК-ДП проводили функциональный тест на индукцию фолликуло-
генеза 
in vivo
после введения ИПСК-ДП под кожу иммунодефицитных мышей линии 
nude с последующим иммуногистохимическим выявлением эпидермальных маркеров 
(К6 и К14), в составе сформированных 
de novo
кожных органоидов в препаратах, 
полученных из зоны введения. На следующем этапе работы ИПСК-ДП и ИПСК-Кц 
использовали для получения ЖЭК в системе transwell и сфероидов, имитирующих 
ранние стадии фолликулогенеза, в системе «висячая капля». Образцы полученных 
препаратов использовали для иммуногистохимического выявления маркеров клеток 
дермальной папиллы (фибронектина и версикана), базальной мембраны (коллаген
 IV
) 
и кератиноцитов (К
14
).
Полученные результаты подтверждают целевой фенотип у полученных клеточных 
линий и их способность к взаимной интеграции в трехмерные клеточные системы. 
Этот факт позволяет утверждать, что разработанные методы и полученные клеточные 
линии могут быть использованы для формирования полноценного ЖЭК с кожными 
дериватами 
in vitro
.
Исследование было поддержано грантом РНФ №16-14-00204.

---

Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
211