Сборник содержит материалы научной мультиконференции «Биотех- нология медицине будущего»

Сравнительное исследование влияния рекомбинантных форм
гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, 
продуцируемых штаммами
 Pichia pastoris
, на дифференцировку 
дендритных клеток
Пыхтина М.Б.
1
, Романов В.П.
1
, Леплина О.Ю.
2
, Черных Е.Р.
2
, Беклемишев А.Б.
1
1
НИИ биохимии ФИЦ ФТМ, г. Новосибирск, Россия 
2
ФГБНУ НИИ фундаментальной и клинической иммунологии, г. Новосибирск, Россия
Препараты рекомбинантного ГМ-КСФ (рГМ-КСФ) человека используются в кли- 
нике для профилактики нейтропении и лечения нейтропенических инфекций. Однако 
короткий период полувыведения этих препаратов и наличие побочных эффектов 
существенно ограничивают применение рГМ-КСФ. В связи с этим, актуальной задачей 
является разработка новых форм лекарственных препаратов на основе рГМ-КСФ, 
обладающих пролонгированным действием и меньшей токсичностью. 
Одним из способов повышения стабильности цитокинов является получение их 
в виде рекомбинантных химерных полипептидов, содержащих транспортные белки 
крови человека такие, как альбумин [1], трансферрин [2] и др. В данной работе были 
получены рГМ-КСФ и его химерная форма с аполипопротеином А-I (апоА-I) человека. 
Ожидалось, что введение апоА-I в состав химера позволит пролонгировать действие 
цитокина за счет длинного периода полужизни апоА-I в крови и его способности
к естественному формированию ЛПВП, которые смогут дополнительно защитить моле- 
кулы цитокина.
Гены 2-х форм ГМ-КСФ были клонированы в клетках 
p. pastoris
шт. X33. Отобранные 
клоны показали высокий уровень экспрессии и секреции обеих форм рГМ-КСФ. 
Очистку белков проводили ионообменной хроматографией на смолах DEAE BioPro 
Q75 и CM-сефарозе. Чистота препаратов составила ~ 95%. Биологическую активность 
цитокинов оценивали по способности индуцировать дифференцировку дендритных 
клеток (ДК), полученных из моноцитов путем культивирования адгезивной фракции 
мононуклеарных клеток с 40 нг/мл ГМ-КСФ и 1000 Ед/мл ИФН-α с последующим 
дозреванием в присутствии липополисахарида. Об эффективности генерации ДК 
судили по экспрессии маркеров моноцитов (CD14) и зрелых ДК (CD83), костимуля-
торных (CD86) и антигенпрезентирующих молекул (HLA-DR), а также способности ДК 
стимулировать пролиферацию аллогенных Т-клеток. Контролем служил рГМ-КСФ, 
клонированный в 
E. coli
(Sigma-Aldrich). Обнаружено, что полученные цитокины не 
уступали контрольному рГМ-КСФ по способности индуцировать дифференцировку и 
созревание ДК из моноцитарных предшественников. 
1. Halpern W., Riccobene T.A., Agostini H., и др. всего 11 человека. Albugranin, a recom-
binant human granulocyte colony stimulating factor (GCSF) genetically fused to recom-
binant human albumin induces prolonged myelopoietic effects in mice and monkeys. // 
pharm. Res. - 2002. - V. 19. - Р 1720–1729.
2. Heinzelman p., priebe M.C. Engineering superactive granulocyte macrophage colony-stimu- 
lating factor transferrin fusion proteins as orally-delivered candidate agents for treating 
neurodegenerative disease. // Biotechnol. prog. - 2015. - V. 31. - Р 668–677.

---

Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
207