|
Анализ микроРНК экзосом молока
Седых С.Е.
1,2
, Пурвиньш Л.В.
1,2
, Невинский Г.А.
1,2
1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН,
Новосибирск, Россия
2 Новосибирский государственный университет, Новосибирск, Россия
Экзосомы – везикулы диаметром от 40 до 100 нм. Экзосомы выделены из различных
биологических жидкостей: плазмы крови, мочи, слез, молока, а также культуральной
жидкости. Известно, что экзосомы содержат белки, липиды, различные формы нуклеи-
новых кислот. В настоящее время биохимические компоненты экзосом молока изучены
значительно менее подробно, чем, например, экзосом плазмы крови или культуральной
жидкости. Показано, что состав экзосом значительно зависит от способа их выделения.
Литературные данные указывают на наличие сотен и тысяч молекул различных
мРНК и микроРНК в составе экзосом. Ранее мы модифицировали стандартный
протокол выделения экзосом, добавив в него стадию гель-фильтрации. Дополнительная
очистка позволяет снизить количество совыделяющихся белков и нуклеиновых кислот
в препаратах экзосом. В данной работе мы провели анализ содержания микроРНК
в экзосомах молока на разных этапах выделения, подобрали подходящие для ПЦР
в реальном времени референсные гены.
Полученные результаты могут быть использованы при планировании экспери-
ментов по доставке биологически активных веществ с использованием экзосом молока.
Исследование было поддержано грантом РНФ № 18-74-10055, госзаданием 0309-2019-0003.
Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
88
Клеточные технологии в создании терапевтических препаратов:
от CAR-клеток до иммортализованных В-лимфоцитов
Филатов А.В.
1,2
, Бязрова М.Г.
1,2
, Миннегалиева А.Р.
1,2
, Лебедин Ю.С.
3
1
ГНЦ Институт иммунологии, Москва, Россия
2
Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, биологический
факультет, Москва, Россия
3
ООО «Хема-Медика», Москва, Россия
Иммунотерапевтические антитела и Т-клетки с химерными рецепторами (CAR-
клетки) доказали свою эффективность при лечении ряда онкологических заболеваний.
Наиболее успешными они оказались при лечении лимфом и лейкозов. Это связано
с тем, что лимфоидные клетки несут на своей поверхности ряд «линейных» антигенов,
которые в своей экспрессии ограничены лимфоидными клетками. К таким антигенам
относятся маркеры CD19, CD20, CD22 и некоторые другие. Гораздо более скромные
результаты были достигнуты при иммунотерапевтическом лечении карцином. Это
связано с ограниченным кругом опухолеспецифических антигенов, характерных для
этого типа клеток.
Потенциальную возможность для создания CAR-клеток против солидных форм
рака предоставляют неоантигены, которые формируются на опухолевых клетках
в результате аберрантного гликозилирования. Одним из неоантигенов является Tn-ан-
тиген, который не встречается на нормальных клетках, но обнаруживается на 70%
карцином. Tn-антиген можно рассматривать как идеальную мишень для иммуно-
терапии карцином.
С помощью генного редактирования нами получены клетки аденокарциномы
MCF-7, дефицитные по гену
Cosmc
, который контролирует корректность O-гликози-
лирования. Модифицированные клетки отличались аберрантным гликозилированием
и в составе белка муцина-1 несли Tn-антиген. Эти клетки были использованы для
иммунизации мышей и получения моноклональных антител против Tn-антигена.
Получено несколько гибридомных клонов, секретирующих антитела против Tn-анти-
гена. Тонкая специфичность антител будет определена на гликочипах. Гены Ig наиболее
аффинных антител будут секвенированы и на их основе будут созданы CAR-клетки.
Активность и специфичность CAR-клеток будет тестирована на Tn+ и Tn- мишенях.
Для получения человеческих антител, специфичных в отношении опухолеассоци-
ированных антигенов, нами развивается подход, основанный на стимуляции
in vitro
В-лимфоцитов от иммунных доноров. В этой системе В-клетки стимулируются
с помощью интерлейкина 21 (IL-21) в сочетании с молекулой CD40L, экспрессиро-
ванной на поверхности фидерных клеток. Стимулированные лимфоциты имморта-
лизуются путем стабильной трансфекции генов BCL-6 и BCL-XL. Нами получены
несколько имморализованных линий В-клеток человека, которые можно отбирать по
секреции антител заданной специфичности. Предложенный подход позволит получать
человеческие моноклональные антитела, пригодные для иммунотерапии опухолей.
Исследование было поддержано грантом РФФИ № 18-29-07025.
Всероссийская мультиконференция с международным участием «Биотехнология – медицине будущего»
29 июня - 2 июля 2019 г., г. Новосибирск, Россия
89
Do'stlaringiz bilan baham: |
