|
Mavzu:4.Kichik molekulali moddalarni IETyordamida aniqlash.
Tibbiyot amaliyotida immunoassay usullari keng qo'llanila boshlandi. Zamonaviy tibbiyotning barcha sohalarida immunoassay asosan diagnostika va tahliliy maqsadlarda qo'llaniladi. Ayniqsa, ular past va juda past konsentratsiyalarda biologik komponentlarni (gormonlar, fermentlar, neyropeptidlar, immun tizimi mahsulotlari, antijenler va boshqalar) aniqlash imkonini berishi juda muhimdir. Antikorlarni olish mumkin bo'lgan barcha mahsulotlar ushbu usullar bilan aniqlanadi.
Immunitetni tahlil qilish antigen (AG) va antikor (AT) ning komponentlardan biri (ferment, radionuklid, lyuminestsent bo'yoq va boshqalar) uchun turli xil yorliqlash variantlari yordamida o'zaro ta'siriga asoslangan. Reaksiyani baholash avtomatik ravishda maxsus jihozlarda amalga oshiriladi, bu esa ushbu usullarni standartlashtirishga imkon beradi.
Amaldagi yorliq turiga va testni o'rnatish shartlariga qarab, immunoassay ferment immunoassay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), immunofluoressensiya va boshqalar deb ataladi. Reaksiyalar bir yoki bir necha bosqichda amalga oshirilsa, ular bevosita yoki bilvosita deb belgilanadi. Reaksiya olib boriladigan muhit muhim ahamiyatga ega. Agar reaktsiya sirtga o'rnatilgan reagentlar bilan amalga oshirilsa, u holda sinov Elishay (ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili) kabi qattiq fazali test sifatida belgilanadi.
Ushbu maqolada faqat ferment immunoassay ko'rib chiqiladi - biologiya va tibbiyotda keng qo'llaniladigan, amaliy va fundamental usul.
Bog'langan immunosorbent tahlili.
Elishay 60-yillarning o'rtalarida paydo bo'lgan va dastlab gistologik preparatdagi antigenni aniqlash, shuningdek, immunodiffuzion test va immunoelektroforezda cho'kma chiziqlarini vizualizatsiya qilish uchun usul sifatida ishlab chiqilgan va keyin antigenlarni miqdoriy aniqlash uchun ishlatila boshlangan va biologik suyuqliklardagi antikorlar. Usulni ishlab chiqishda E. Engvall va R. Pelman, shuningdek, ulardan mustaqil ravishda V. Van Veeman va R. Shurs ishtirok etdi.
Shakl 1. Elishayning asosiy printsipi.
1) Antigenlarni aniqlash uchun. 2) Antikorlarni aniqlash.
Usul antikorning antijen bilan o'ziga xos bog'lanishiga asoslanadi, komponentlardan biri ferment bilan konjugatsiyalanadi; mos keladigan xromogen substrat bilan reaktsiya natijasida rangli mahsulot hosil bo'ladi, uning miqdori bo'lishi mumkin. spektrofotometrik tarzda aniqlanadi (1-rasm).
Har xil tashuvchilarda antigen va antitellarni immobilizatsiya qilish, ularning bog'lanish faolligini saqlab qolish imkoniyatining ochilishi biologiya va tibbiyotning turli sohalarida Elishay dan foydalanishni kengaytirish imkonini berdi.
Monoklonal antikorlarning paydo bo'lishi Elishayning keyingi rivojlanishi bo'lib xizmat qildi, bu uning sezgirligini, o'ziga xosligini va natijalarning takrorlanishini oshirishga imkon berdi.
Nazariy jihatdan, Elishay zamonaviy immunokimyo va kimyoviy enzimologiya ma'lumotlariga, antigen-antikor reaktsiyasining fizik-kimyoviy qonuniyatlarini bilishga, shuningdek, analitik kimyoning asosiy tamoyillariga asoslanadi. Elishayning sezgirligi va uning davomiyligi bir necha asosiy omillar bilan belgilanadi: antigen-antikor reaktsiyasining kinetik va termodinamik xususiyatlari, reagentlar nisbati, ferment faolligi va uni aniqlash usullarining o'lchamlari. Umuman olganda, antigen-antikor reaktsiyasini oddiy sxema bilan tavsiflash mumkin:
[AT]+[AG]↔[ATAG]
Past molekulyar og'irlikdagi birikmalardan tortib viruslar va bakteriyalargacha bo'lgan o'rganish ob'ektlarining xilma-xilligi, shuningdek, Elishay dan foydalanish shartlarining xilma-xilligi bilan bog'liq bo'lgan g'ayrioddiy keng ko'lamli vazifalar ushbu usulning juda ko'p sonli variantlarini ishlab chiqishni aniqlaydi. .
Elishayning har qanday varianti 3 ta majburiy bosqichni o'z ichiga oladi:
1. immun kompleks hosil bo'lishiga olib keladigan, sinov birikmasini unga xos bo'lgan antikor tomonidan tan olinishi bosqichi;
2. konjugatning immun kompleks yoki erkin bog'lanish joylari bilan bog'lanishining shakllanish bosqichi;
3. ferment belgisini ro'yxatga olingan signalga aylantirish bosqichi.
Elishay tasnifi.
Elishay usullarini tasniflash bir nechta yondashuvlarga asoslanadi:
1. Elishayning birinchi bosqichida mavjud bo'lgan reaktivlar turiga ko'ra, raqobatbardosh va raqobatdosh bo'lmagan usullar farqlanadi.
A) Raqobatbardosh Elishay usulida, birinchi bosqichda tizim tahlil qilingan birikmani ham, uning analogini ham o'z ichiga oladi, ferment bilan belgilangan va u bilan muayyan bog'lanish joylari uchun raqobatlashadi.
B) Raqobatsiz usullar uchun tizimda birinchi bosqichda faqat tahlil qilinadigan birikma va unga xos bog`lanish markazlarining bo`lishi xarakterlidir.
2. Barcha Elishay usullari bir hil va heterojen bo'linadi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
