Сборник научных трудов

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ 
38 Проблемы биологии и медицины, 2018, №3,1 (103)
НЕСТРУКТУРНЫЙ БЕЛОК NSP3 В ДИАГНОСТИКЕ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 
Ибадуллаева Н.С., Норбаев И.М., Локтева Л.М., Жолдасова Е.А., Казакова Е.И. 
НИИ Вирусологии МЗ РУз 
Ротавирусы группы А (RVA) являются наиболее частой причиной тяжелых диарей у детей младшего возраста 
во всем мире. По оценкам ВОЗ, RVA ежегодно вызывают 215000 случаев смертей среди детей в возрасте до 5 лет. 
Ротавирусы (лат. Rotavirus) относятся к семейству Reoviridae и являются возбудителями ротавирусной инфекции. Ге-
ном ротавируса состоит из 11 уникальных двунитевых РНК сегментов которые кодируют 6 структурных (VP1, VP2, VP3, 
VP4, VP6, VP7) и 6 неструктурных (NSP1-NSP6) белков. Для выявления RVA в образцах стула применяются различные 
методы диагностики: выделение вируса в культуре клеток, электронная микроскопия, иммуноферментный анализ 
(ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР). Исследования с использованием ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-
ПЦР) в режиме реального времени, нацеленные на сегменты гена RVA VP4, VP6, VP7, показывают более высокую 
чувствительность в детекции ротавируса по сравнению с ИФА. NSP3 область является высококонсервативным регио-
ном по сравнению с другими сегментами генома, включая VP4, VP6 и VP7 используемыми для разработки других ОТ-
ПЦР методов. NSP3 белок, кодируемый геномным сегментом 7, является лучшей мишенью для обнаружения широкого 
разнообразия генотипов RVA. Цель исследования. Определить значение неструктурного белка NSP3 в диагностике 
ротавирусной инфекции. Материалы и методы исследования. Для проведения исследований были отобраны образцы 
стула, собранные в 2015 г. у детей в возрасте до 5 лет, госпитализированных с острыми кишечными инфекциями. Для 
определения NSP3 белка методом случайной выборки отобрано 227 образцов стула отрицательных на антиген рота-
вируса. Экстракция РНК ротавируса осуществлялась с применением QIAamp Viral RNA Mini набора (Qiagen, GmbH, 
Hilden, Germany). Наличие NSP3 белка определяли методом одностадийного ОТ-ПЦР в режиме реального времени с 
использованием набора Rotavirus Real-Time RT-PCR, праймеров NVP3-FDeg, NVP3-R1 и зонда NVP3-Probe (CDC, At-
lanta). Генотипирование RVA проводили методом ОТ-ПЦР с использованием наборов Qiagen One-Step RT-PCR 
(Qiagen, Inc. Valencia, CA) и Rotavirus Genotyping Oligonucleotide Primers (CDC, Atlanta). Результаты исследования. Ме-
тодом одностадийного ОТ-ПЦР в режиме реального времени NSP3 белок был выявлен в 26/227 (11,5%) случаев, что 
свидетельствует о наличии ротавирусной инфекции. Положительный результат на NSP3 белок позволил в дальней-
шем провести генотипирование 24/26 (92,3%) образцов. G типы RVA были определены в 23 (95,8%) случаев, 1 (4,2%) 
образец не типировался. Р типы RVA были определены в 22 (91,7%) случаев и 2 (8,3%) случаях не типировались. Были 
выявлены следующие комбинации генотипов RVA: G1P[8]-14 (58,3%), G2P[4]-6 (25,0%), G2P[8]-1 (4,2%), G2P[nt]-2 
(8,3%), GntP[8]-1 (4,2%). Выводы. Таким образом, одностадийный ОТ-ПЦР в режиме реального времени с использова-
нием праймеров, нацеленных на NSP3 белок является высокочувствительным и специфичным методом диагностики 
для выявления широкого спектра генотипов RVA. Применение тестирования NSP3 белка в алгоритме диагностики RVA 
позволит выявить долю истинно положительных образцов, что даст возможность в дальнейшем провести генотипиро-
вание этих образцов и определить региональные генетические характеристики возбудителя, а также проводить корре-
ляции с данными полученными с помощью других методов диагностики.