Практикум ч асть у глеводы

Материалы исследования и реактивы
.
Молочная сыворотка; 
сыворотка крови; 0,1%-й раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 1 н. 
HCl; 2,5 %-й спиртовой раствор КOH. 
Приборы.
Фотоэлектрический колориметр МКМФ-1 с синим 
светофильтром и кюветами с рабочим расстоянием 10 мм; пробирки; 
пипетки емкостью 1 мл. 
Ход определения.
Берут две пробирки. В одну пробирку нали-
вают 1 мл сыворотки, в другую – 1 мл воды (контроль), затем вли-
вают в обе пробирки по 1 мл спиртового раствора КОН и пере-
мешивают точно в течение 1 мин. После этого доливают по 0,5 мл 
раствора 2,4-динитрофенилгидразина, перемешивают и оставляют 
стоять в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем измеряют 
оптическую плотность рабочего раствора относительно контроля
на фотоколориметре с синим светофильтром. Содержание ПВК
(в процентах) находят по калибровочному графику, построенному 
для ряда растворов с определенными, точно известными концентра-
циями ПВК. 
1.5. 
Выделение углеводов 
 
Углеводы извлекают методом экстракции из животных и рас-
тительных тканей с помощью 75 %-го этанола, раствора гидроксида 
калия на кипящей водяной бане, 5 %-го раствора трихлоруксусной 
кислоты и другими методами. Для разделения углеводов применяют 
различные виды хроматографии. 
1.5.1. Выделение гликогена из тканей животных 
Материалы исследования и реактивы
.
Ткань животного 
(печень, мышечная ткань, мозг и др.), 15 %-й и 60 %-й растворы 
гидроксида калия, этанол, лед, реактив Люголя. 
Приборы.
Штатив с центрифужными и обычными пробирками; 
водяная баня; пипетки градуированные вместимостью 2 и 10 см
3
; 
стакан; центрифуга. 
Ход определения.
 
В центрифужную пробирку помещают 1,5–2 г 
животной ткани и добавляют 2 мл 60 %-го раствора КОН. Пробирку 
ставят на 1 ч в кипящую водяную баню, содержимое пробирки часто 
взбалтывают. Затем пробирку вынимают из бани, охлаждают и до-

---

25 
бавляют в нее 8–10 мл этанола. Выпавший осадок гликогена от-
деляют центрифугированием в течение 5–10 мин при скорости вра-
щения 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок раст-
воряют в 2 мл 15 %-го раствора гидроксида калия, добавляют 8–10 мл 
этанола и охлаждают полученную смесь. Выпавший снова осадок 
гликогена отделяют центрифугированием. Затем растворяют неболь-
шую часть осадка в нескольких каплях воды и добавляют реактив 
Люголя. Появление красного окрашивания доказывает наличие 
гликогена. 
1.5.2. Выделение углеводов из растительных тканей
и их разделение методом тонкослойной хроматографии