Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Работа 2. Разделение смеси аминокислот методом 
распределительной хроматографии на бумаге 
Для определения аминокислот разработано множество методов
:
фермента­
тивные, изотопные, электрофоретические, хроматографические
.
 
Аминокис
­
 
лотный анализ существенно способствовал бурному развитию химии белка
.
Главными областями применения аминокислотного анализа являются 
установление аминокислотного состава белковых гидролизатов
,
определение 
первичной структуры белков
,
аналитический контроль пептидного синтеза
,
а 
также клиническая диагностика
.
Определение свободных аминокислот важно для 
изучения обмена белков в организме
.
В норме в плазме крови содержится около 
21,42 
ммоль
/ 
л аминокислот
,
с мочой выделяется 
0,5 
г аминокислот
.
При 
нарушении
­
функций отдельных органов или физиологических систем крови
,
мочи наблюдаются изменения в содержании аминокислот
. 
Не меньший интерес представляет также изучение аминокислотного 
соста
-
ва пищевых белков и белковых смесей
,
определяющего в значительной 
мере характер
­
влияния пищи на организм и пищевой ценности белка и 
белковых смесей
. 
При 
хроматографическом разделении
смесь веществ в подвижной фазе 
транспортируется через неподвижную фазу
.
При этом компоненты смеси 
из
‑
за различий в строении
,
растворимости
,
полярности
,
заряде вступают в 
специфическое взаимодействие с неподвижной фазой
,
которое обуславливает 
различные скорости транспорта компонентов смеси
. 
В
соответствии с агрегатным состоянием подвижной фазы различают 
жид­
костную 
и
 газовую 
хроматографии
.
В
зависимости от типа физико
-
химического взаимодействия между актив
­
ным адсорбентом и находящимся в растворе веществом различают три вида 
хроматографии
:
адсорбционную,
распределительную,
ионную.
Адсорбционная
хроматография основана на сорбции растворенного вещества поверхностью 
твердой фазы
.
В 
распределительной
хроматографии вещество распределяется 
между жидкими фазами
,
одна из которых неподвижна
.
Ионообменная
хромато
­
графия основана на образовании ионных соединений между растворенными 
веществами и заряженными группами сорбента
.
На практике эти процессы 
19 

---

чаще протекают совместно. По методическим особенностям, по технике 
выполнения­ различают хроматографию: 
тонкослойную,
бумажную,
колоночную
.
 
Различают
 
виды хроматографии и по направлению движения подвижной
 
фазы: 
восходящая,
нисходящая,
радиальная,
одномерная,
двумерная
. 
Бумажная хроматография, впервые примененная в 1944 г. Консденом, Гор­ 
доном, Мартином, представляет собой распределительную хроматографию, при 
которой адсорбционно связанная с целлюлозой вода образует стационарную 
(неподвижную), а смесь органических растворителей — подвижную фазу. 
Непрерывная­ диффузия растворенных компонентов из одной фазы в другую 
приводит­ к их распределению между фазами. Более гидрофобные аминокислоты 
лучше растворяются в органических растворителях и движутся с большей 
скоростью, чем гидрофильные аминокислоты. В результате этого аминокисло-ты 
по окончании хроматографического разделения оказываются на разном рас-
стоянии от линии старта. Аминокислоты определяют с помощью нингидрина. 
Положение­ определенных пятен на хроматограмме характеризуется коэффи-
циентом удерживания R
f
: 
l
аминокислоты 
R
f
 
=
 
l
———— 
растворителя 
Существует определенная связь между строением аминокислот и значени-
ем R
f
. Аминокислоты с заряженными или полярными радикалами имеют 
более низкие значения R
f
, с повышением гидрофобности радикала 
повышается зна-чение R
f
.