Структура и функции белков и пептидов

Разделение белков методом гель-фильтрации 

---

13 
Ультрацентрифугирование
Этот метод основан на различной скорости седиментации (осаждения) белковых мо-
лекул в растворах с различным градиентом плотности (сахарозный буфер или хлорид цезия) 
(рис. 2.2). 
 
Рис. 2.2.
Разделение белков методом ультрацентрифугирования 
Электрофорез
Данный метод основан на различной скорости миграции белков и пептидов в элек-
трическом поле в зависимости от заряда.
Носителями для электрофореза могут служить гели, ацетатцеллюлоза, агар. Разделяе-
мые молекулы движутся в геле в зависимости от размера: те из них, которые имеют бóльшие 
размеры, будут задерживаться при прохождении через поры геля. Меньшие молекулы будут 
встречать меньшее сопротивление и, соответственно, двигаться быстрее. В результате, после 
проведения электрофореза, бóльшие молекулы будут находиться ближе к старту, чем мень-
шие (рис. 2.3). 
Рис. 2.3
. Разделение белков методом электрофореза в геле 
Методом электрофореза можно разделить белки и по молекулярной массе.
Для этого 
используют 
электрофорез в ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия (ДДS-Na)
.

---

14 
ДДС-Na является дифильным 
веществом и содержит заряженную 
группу и гидрофобную. Белки связыва-
ются с ДДС-Na своими гидрофобными 
радикалами и при этом денатурируют. 
Таким образом, белки выравниваются 
по форме и заряду. После этого подвиж-
ность белка при электрофорезе зависит 
только от его молекулярной массы. 
Додецилсульфат натрия 
(ДДС-Na) 
Выделение индивидуальных белков 
Аффинная хроматография
Метод основан на способности белков прочно связы-
ваться с различными молекулами нековалентными связями. 
Используется для выделения и очистки ферментов, имму-
ноглобулинов, рецепторных белков. 
Молекулы веществ (лиганды), с которыми специфиче-
ски связываются определенные белки, ковалентно соединяют 
с частицами инертного вещества. Смесь белков вносят в ко-
лонку, и искомый белок прочно присоединяется к лиганду. 
Остальные белки свободно выходят из колонки. Задержанный 
белок затем можно вымыть из колонки с помощью буферного 
раствора, содержащего в свободном состоянии лиганд. Этот 
высокочувствительный метод позволяет выделить в чистом 
виде очень малые количества белка из клеточного экстракта, 
содержащего сотни других белков.