Ўзбекистон миллий университети биология факультети



Download 0,73 Mb.
Pdf ko'rish
bet14/19
Sana24.02.2022
Hajmi0,73 Mb.
#239966
1   ...   11   12   13   14   15   16   17   18   19
Bog'liq
ЛАБ МАШҒУЛОТЛАРИ ВИРУСОЛОГИЯ ЎЗБЕКЧА 2019

 
 
9- лаборатория иши 


Вирусларни қисман тозаланган препаратини олиш 
Ишдан мақсад. Юқори ион кучига чидамли вирусларни аммоний сульфати 
ёрдамида қисман тозалаш методи билан таништириш. 
Керакли материаллар.  ТМВ билан касалланган тамаки барги (500 г);
0,1М фосфат буфери, рН 7,0-7.5; 0,1 н НС1; 0,1 н NaOH;. ЭДТА; аммоний 
сульфат; хлороформ; вирус экстракциягида ишлатиладиган асбоб- ускуна ва 
идишлар. 
Ишнинг бориши: Вирус билан касалланган ўсимлик барги 1:1 нисбатдаги 
0,1М ФБ (рН 7,5) билан гомогенизация қилиниб, хлороформ билан ишлов 
берилиб тозаланган вирус экстрактига 20% аммоний сульфати солиниб яхшилаб 
аралаштирилади. Сўнгра 30 минут давомида совутгичда тутилади, чўкмага 
талайгина балласт моддалар тушади. Уларни минутига 3минг айл/тезлигида 20 
минут давомида центрифуга қилинади.Чуўкма усти суюқлигига 25% гача 
аммоний сульфат солинади ва яхшилаб аралаштирилади ва яна 60 минут
кристаллар ҳосил бўлиши учун сақланади. Инкубация вақтида вирус 
паракристаллари ҳосил бўлиши жараёнида ипаксимон ялтираш пайдо бўлади. 
Вирусли идиш вирус тўлиқ кристалланиши ва чўкиши учун кечасига 
совутгичда қолдирилиб кетилади. Эртасига сифон ёрдамида чўкма усти суюқлиги 
ажратилади. Қолган чўкмадаги вирусли суспензия минутига 6 - 8 минг айланиш 
тезлигида 15- 20 минут центрифуга қилинади ва чўкма 100мл 0,01М фосфат 
буферига, рН 7,5 (0,005М ЭДТА солинган эритувчида) эритилади. Сўнгра 
тозалашнинг кейинги боскичида диализ қилинади. Бу жараёнда вирусли 
суспензия таркибидаги ионлар йўқотилади, ҳамда ўсимликни кўпгина моддалари 
денатурацияланиб эримайдиган ҳолатга ўтади. 
Диализ қопчасига вирусли суспензияни солингандан сўнг уни 3- 5 литрли сув 
ёки буфер эритмаси тўлатилган идишга тушириб қўйилади. Сувли идиш магнитли 
айлантиргичга ўрнатилади. Диализ 24 соат давомида олиб борилиб, шу даврда 3 
марта диализ суви (буфер) алмаширилади. Диализ тугагандан сўнг препарат 10 
минут 15-18 минг айл/тезлигида центрифуга қилинади. Чўкма ташлаб юборилади. 
Вирусли эритмани (чўкмаусти суюқлиги) қайтадан 25% ли сульфат аммоний 
билан чўктирилади ва 20-30 минутдан сўнг 20 минут давомида 6минг 
айл/тезлигида центрифуга қилинади. Чўкмаусти суюқлиги ташлаб юборилади
чўкмали стакан эса тоза фильтр қоғози устига (тузли эритма оқиб тушиши учун) 
тўнтариб қўйилади. Сўнгра чўкмани 20 мл 0,01М фосфат буферида (рН 7,0- 7,5) 
эритилади ва 15-18 минг айланиш тезлигида центрифуга қилиниб, эримаган 
қисмидан ажратиб ташланади. 
Шу усулда ажратиб олинган қисман тозаланган препарат энди бошқа 
усуллар билан тўлик тозаланиши мумкин. 

Download 0,73 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   11   12   13   14   15   16   17   18   19




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish