67
Для обнаружения подвижности
бактерий готовят препараты
«висячая капля» или «раздавленная капля», используя молодые (од-
носуточные) бульонные культуры бактерий. При наблюдении под
микроскопом в поле зрения хорошо видно активное перемещение от-
дельных клеток в разных направлениях и с разной скоростью.
7.4
. Окрашивание спор бактерий
Благодаря особенностям своего строения споры бактерий об-
ладают высокой устойчивостью к различным неблагоприятным фак-
торам внешней среды. При обычной обработке препарата метилено-
вым синим споры не окрашиваются и выглядят как бесцветные круг-
лые, овальные
или эллипсовидные тельца, хорошо преломляющие
свет. Это объясняется тем, что оболочка
споры обладает большой
плотностью, характеризуется высоким содержанием липидов и в са-
мой споре отсутствует свободная вода. Методы окрашивания спор
основаны на применении протравливающих веществ (обычно слабых
кислот, разрыхляющих оболочку споры) и дальнейшей окраске мазка
красителем при нагревании. Окрасившийся протопласт споры удер-
живает краситель прочнее, чем цитоплазма клетки, поэтому он, в от-
личие от
цитоплазмы, не обесцвечивается при последующей обра-
ботке кислотой. Обесцвеченную цитоплазму дополнительно окраши-
вают контрастным красителем.
Метод Циля –Нильсена
1. Готовят обычным способом фиксированный препарат бак-
терий.
2. На препарат наносят 5 %-й раствор хромовой кислоты и вы-
держивают в течение 5–10 мин.
3. Кислоту смывают водой, на препарат наносят полоску филь-
тровальной бумаги и обильно смачивают ее карболовым фуксином.
Подогревают препарат над пламенем спиртовки до появления паров
(не доводя до кипения), затем отводят его в сторону и добавляют но-
вую порцию красителя. Эту процедуру проводят в течение 5–7 мин.
Важно, чтобы краситель не испарялся и бумага не подсыхала.
4. После охлаждения предметного
стекла бумагу снимают,
препарат промывают водой и обрабатывают 1 %-м раствором соляной
или серной кислоты в течение 15–30 с. При приготовлении препарата
68
спорообразующих палочек
В. subtilis, B. mycoides
или
B. mesentericus
цитоплазму клеток рекомендуется обесцвечивать в течение 16–18 с.
5. Препарат окрашивают метиленовым синим в течение 1–2 мин,
затем краситель смывают, препарат осушают фильтровальной бумагой
и рассматривают с иммерсионным объективом.
При такой обработке препарата
споры окрашиваются в крас-
ный цвет, а вегетативные клетки – в синий.
Метод Пешкова
1. На приготовленный фиксированный препарат наливают ме-
тиленовый синий Леффлера и,
держа стекло над пламенем, кипятят
в течение 15–20 с, не допуская высыхания краски.
2. Мазок промывают водой и докрашивают 0,5 %-м раствором
нейтрального красного в течение 30 с.
3. Препарат промывают водой, осушают и рассматривают с им-
мерсионным объективом.
При этом методе окраски споры окрашиваются в голубой или
синий цвет, а цитоплазма клеток – в розовый.
Для идентификации бактерий важно выяснить тип споро-
образования (бациллярный, клостридиальный или плектридиальный),
расположение эндоспоры в клетке (полярное,
центральное, эксцен-
тральное), форму свободных спор (округлые, овальные, цилиндриче-
ские). Для этой цели используют двух- или трехсуточные культуры
спорообразующих бактерий.
Do'stlaringiz bilan baham: