|
Spektrofotometrik usul. Bu usul ishqoriy muhitda polisaxaridlarning pikrin kislota bilan gidrolizlanishidan keyin hosil bo'lgan monosaxaridlarning o'zaro ta'siridan hosil bo'lgan mahsulotlarning optik zichligini o'lchashga asoslangan. Bu usul farmakopeya usuli emas, ammo ma'lum turdagi xomashyolar (tuyatovon barglari, yurak shaklidagi jo'ka gullari, ko'k makkajo'xori gullari va boshqalar), shuningdek quruq altey shilimshiqlari uchun polisaxaridlarni spektrofotometrik aniqlash usullari ishlab chiqilgan va taklif qilingan.
Xom devisil tarkibidagi inulinning miqdoriy tarkibini baholash uchun inulinning bo'linishidan keyin hosil bo'lgan fruktoza va kislotali muhitda rezorsinol bilan o'zaro ta'sir qilish mahsulotlarining optik zichligini o'lchashga asoslangan spektrofotometrik aniqlash usuli ishlab chiqilgan. Karahindiba ildizini standartlashtirish uchun shakarning (fruktoza, saxaroza) konsentrlangan kislotalar bilan qizdirilganda 200-380 nm mintaqada so'rilishi bilan mahsulot hosil qilish qobiliyatiga asoslangan fruktozanlarni kislotaga aylantirilgandan so'ng to'g'ridan-to'g'ri spektrofotometrik aniqlash usuli ishlab chiqilgan.
Jo'ka gullarining polisaxaridlar majmuasida qaytaruvchi shakar miqdorini miqdoriy aniqlash (Flores Tilae, SP XIII, FS 2.5.0024.15). Xom ashyoning analitik namunasi 2 mm teshiklari bo'lgan elakdan o'tadigan zarrachalar hajmiga qadar maydalanadi. Taxminan 1,0 g (aniq tortilgan) maydalangan xom ashyo 250 ml dumaloq tubli kolbaga solinadi, 60 ml 75% li spirt, 0,3 g kaltsiy karbonat qo’shiladi va qaynab turgan suv hammomida 45 daqiqa davomida refluks ostida qizdiriladi.Xom ashyoning zarralari dumaloq tubli kolbada qolishiga ishonch hosil qilib, sovutib, qog‘oz filtr orqali 100 ml hajmli o‘lchov kolbasiga soling. Pastki dumaloq kolbaga 30 ml 75% li spirt solinadi va flavonoidlar qaynab turgan suv hammomida 15 minut qizdirilganda qayta ekstraksiya qilinadi. Ekstrakt sovutiladi va bir xil filtr orqali 100 ml hajmli bir xil o'lchov kolbasiga filtrlanadi, ehtiyotkorlik bilan drenajlanadi, dumaloq tubli kolbada xom ashyo zarralari qolishiga ishonch hosil qilinadi. Xom ashyo va filtr 10 ml spirt 75% bilan yuviladi, eritmaning hajmi 75% spirt bilan belgiga keltiriladi va aralashtiriladi (A eritma). Xom ashyo solingan dumaloq tubli kolbaga 45 ml suv quyiladi va qaynayotgan suv hammomida 60 daqiqa davomida reflyuks ostida isitiladi, issiq ekstrakt vakuumda diametri 25 mm bo'lgan POR 16 shisha filtri orqali filtrlanadi. Shisha filtrdagi va dumaloq tubli kolbadagi xom ashyo 5 ml suv bilan yuviladi. Ekstrakt miqdori 50 ml hajmli o'lchov kolbasiga o'tkaziladi, kolbadagi eritmaning hajmi suv bilan belgiga sozlanadi va aralashtiriladi (B eritmasi).
20,0 ml B eritmasi dumaloq dumaloq kolbaga solinadi, ustiga 7 ml konsentrlangan xlorid kislota qo’shiladi va 10 minut davomida qaytariladi. Olingan ekstraktga 6 ml 40% li natriy gidroksid eritmasidan tomchilab qo'shiladi, agar eritma ishqoriy bo'lsa, u holda pH 4,0-4,5 gacha suyultirilgan xlorid kislota eritmasi tomchilab qo'shiladi. Olingan eritma miqdoriy jihatdan 50 ml hajmli o'lchov kolbasiga o'tkazildi, eritmaning hajmi suv bilan belgilangan belgiga moslashtirildi va aralashtiriladi. Ekstraktni qog'oz filtr orqali filtrlang, birinchi 10-15 ml filtratni (B eritmasi) tashlang. 10,0 ml B eritmasi 25 ml hajmli o`lchov kolbasiga solinadi, 0,5 ml 10 % li qo`rg`oshin atsetat eritmasidan qo`shiladi va aralashtiriladi. 5 daqiqadan so'ng 1,5 ml 5% natriy fosfat eritmasi qo'shiladi, aralashtiriladi, 2 daqiqaga qoldiriladi, eritmaning hajmi suv bilan belgilanadi, aralashtiriladi, qog'oz filtrdan o'tkaziladi, birinchi 5-10 ml tashlanadi. filtrat (eritma D). 50 ml sig‘imli 4 ta konussimon kolbaga 2,5 ml 1 % li pikrik kislota eritmasidan, keyin 7,5 ml 20 % li natriy karbonat eritmasidan solinadi. Birinchi kolbaga 5,0 ml C eritmasi (tekshiriluvchi eritma), ikkinchisiga 5,0 ml D eritmasi (1-yo'naltiruvchi eritma), uchinchisiga 5,0 ml glyukoza CO eritmasi (CO eritmasi), 5,0 ml suv qo'shiladi. mos yozuvlar yechimi 2). Tarkibi bo'lgan kolbalar 10 daqiqa davomida qaynayotgan suv hammomiga botiriladi, so'ngra xona haroratiga qadar sovutiladi va tarkibi miqdori 25 ml hajmli o'lchov kolbalariga o'tkaziladi, kolbalardagi eritmalar hajmi belgiga moslashtiriladi. suv va aralashtiriladi.1 va 2 etalon eritmalarga nisbatan qatlam qalinligi 10 mm bo'lgan kyuvetada 470 nm to'lqin uzunligidagi spektrofotometrda tekshirilayotgan eritma va CO eritmasining optik zichligini o'lchang.
Mutlaqo quruq xomashyoda glyukoza bo'yicha qaytaruvchi shakar miqdori (polisaxaridlar tarkibida) foizda (X) quyidagi formula bo'yicha hisoblanadi:
А*ао *5*50*50*25*100*100*Р А*ао *5000*Р
Х = Ао *250*25 *а*20 *5*(100 - w)*100 * А о *а*(100 * w)* 100 , bu erda
A - tekshiriluvchi eritmaning optik zichligi;
A0 - glyukoza CO eritmasining optik zichligi; A - xom ashyo namunasi, g; ao - suvsiz glyukoza bo'yicha glyukozaning SS namunasi, g; P - glyukoza CO tarkibidagi asosiy moddaning miqdori, %; w - xom ashyo namligi, %. titrimetrik usul. O'simliklardan ajratilgan polisaxaridlar fraktsiyasini sifat va miqdoriy baholashning ushbu usuli yod bilan polisaxaridlar majmuasini hosil qilish reaktsiyasi (orqa yodmetrik titrlash) orqali taklif qilingan va psyllium va koltsfootning suvda eruvchan polisaxaridlari uchun sinovdan o'tgan.
Antigen-antitelo reaktsiyasi orqali ferment immunoassay. Usul nafaqat moddaning sifatini, balki uning immun faoliyatini ham baholashga imkon beradi, ya'ni. biologik harakat. Bu usul Echinacea purpurea va boshqalar ekstraktlarida immunoaktiv polisaxaridlar va glikoproteinlar fraktsiyasini aniqlash uchun ishlatiladi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
