Muhandislik qilingan oqsil-oqsil kompleksining strukturasini aniqlash va termodinamik stabilizatsiyasi

Affibody molekulalari
6.1 Protein A
6.2 Z domeni
6 ta affitel molekulalari
sirt retseptorlari, ularning yuzasida takrorlanuvchi domenlar mavjud. Ular xost oqsillari bilan bog'lanadi va mavjud
(Uhlen va boshq. 1984). Taxminan 58 aminodan iborat beshta gomologik domenlar (E, D, A, B va C).
Ba'zi patogen gram-musbat bakterial shtammlar langarlangan hujayra devorini ifodalashi aniqlangan
kislotalarning har biri aniqlandi, ularning barchasi Fc ga alohida bog'lanadi (Moks va boshq. 1986). Ularda ham bor
qoldiqlari, bu uni siyanogen bromid parchalanishiga chidamli qildi. Bundan tashqari, kristalldan olingan ma'lumotlar
al. 1996). Stafilokokk A oqsilining to'liq ketma-ketligi Uhlen va uning hamkasblari tomonidan olingan
ketma-ketlik besh domenning konsensusiga eng yaqin edi va unda metionin yo'q edi
Ikkita aminokislota almashtirildi, biri klonlash uchun (A1V) va ikkinchisi gidroksilni olib tashlash uchun.
rekombinant oqsillarni tozalash. SPA ning B-domeni shablon sifatida tanlangan
inson immunoglobulinlarining (VH3) cheklangan miqdordagi Fab fragmentlari (Sasso va boshq. 1991; Potter va boshqalar.
Z domeni dastlab ifodani osonlashtirish uchun termoyadroviy oqsil sifatida foydalanish uchun mo'ljallangan edi
va Uilyams 1969; Ankerst va boshqalar. 1974). SPA ham a ning og'ir zanjiriga bog'lanishi aniqlandi
28
1, 2 va 4 kichik sinflar (Langone 1982; Eliasson va boshq. 1988), lekin faqat 3 kichik sinfga nisbatan zaif (Kronvall) .
Wells 1996), lekin Fab bog'lanishi G29A mutatsiyasi tufayli juda zaif (Jansson va boshq. 1998).
(SPA) inson IgG ning Fc mintaqasi (Forsgren va Sjöquist 1966) bilan bog'lovchi sifatida tavsiflangan.
rekombinant oqsillar uchun afinite yorlig'i (Ståhl va Nygren 1997).
o'xshash yaqinlik (KD 10-70 mkM) va on-off-kinetik (Jendeberg va boshq. 1995; Braisted va
amin parchalanish joyi (G29A) (ref Nilsson va boshqalar. Prot. Eng. 1987). B va Z-domenlari Fc bilan bog'lanadi
bakteriyaning virulentligida rol o'ynagan deb ishoniladi. Staphylococcus aureus dan A oqsili
Protein A antikorlarni tozalash va aniqlash uchun keng qo'llaniladi (Langone 1982) va
Fc bilan kompleksdagi B-domenining tuzilishi o'sha paytda mavjud edi (Deisenhofer 1981).
Ayrim antikorlarning Fab mintaqasi uchun µM yaqinliklari (Jansson va boshq. 1998).
Machine Translated by Google

---