ANTRACT
iii
lekin uning ijobiy hissasi kamroq qulay desolvatsiya entalpiyasi o'zgarishiga qarshi turadi. Bu tadqiqotlar
1, bog'lovchi oqsillar guruhiga mansub, kombinator orqali hosil bo'lgan affitel molekulalarini bildiradi.
barqaror va ZSPA-1 ning muhim qismi xona haroratida to'liq ochilgan holatda mavjud. A
Z: ZSPA-1 juftligining to'liq termodinamik tavsifi shuni ko'rsatadiki, erigan globul holatini kompleksdagi tartiblangan uchta
spiral strukturaga barqarorlashtirish bog'lanish yaqinligiga salbiy ta'sir ko'rsatishi mumkin bo'lgan muhim konformatsion
entropiya jazosi bilan bog'liq.
kiritilgan sistein ko'prigi entropiya bilan emas, balki bog'lanish entalpiyasining ortishi bilan bog'liq.
Ikki 6 kDa oqsil o'rtasidagi o'zaro ta'sir o'rganildi. Mikromolyarlarning o'rganilayotgan
kompleksi
ko‘plab konformatsiyalar bilan ifodalanadi. Bundan tashqari, erigan globul holati faqat chegarada
bitta mutantning yaqinligi o'n baravardan ko'proq yaxshilanganligini ko'rsatdi. ni takomillashtirish
Z domenining o'rtacha topologiyasi erigan globul holatida saqlanib qoladi, deb taklif qildi, lekin u
ulanishdan keyin yuzaga keladigan barqarorlashuvdan keyin qabul qilingan. ZSPA-1
ning yanada kengroq tavsifi
deyarli 400 Å2 , ya'ni kompleksdagi umumiy o'zaro ta'sir yuzasining deyarli yarmi bilan. Ikki sistein qoldig'i
konformatsiyasini barqarorlashtirish uchun beshta mutant uchun ZSPA-1 ning aniq pozitsiyalariga kiritilgan.
yaxshilangan bog'lanish yaqinligi bilan ZSPA-1 mutantining dizayni bilan qo'llab -quvvatlandi.
oqsil erigan globulalar bilan taqqoslash bilan eng yaxshi tavsiflanadi. Bu kamaytirilgan ikkilamchi tuzilish tarkibini, agregatsiya
moyilligini, yomon termal barqarorlikni ko'rsatadi va hidrofobik bo'yoq ANSni bog'laydi. ZSPA-1 ning bu erigan globul holati
Z domeni bo'lmaganda mahalliy holat bo'lib, tartiblangan holat faqat
Biz kompleksda juda katta (taxminan 1600 Å2) o'zaro ta'sir interfeysi qattiq sterik va qutbli/polyar bo'lmagan komplementarlik
mavjudligini aniqladik. Kompleksdagi ZSPA-1 tuzilishi Z domeniga juda o'xshash konformatsiyada yaxshi tartiblangan. Biroq,
bepul ZSPA-1 ning konformatsiyasi
erkin va bog'langan holatda ZSPA-1 bilan kompleks hosil bo'lganda induksiyalangan
mos javobni aniqlaydi , bunda bog'lovchi
sirtdagi bir nechta yon zanjirlarning konformativ o'zgarishi kirish mumkin bo'lgan sirt maydonini oshiradi.
affibody murakkab shakllanishda ishtirok etadigan murakkab mexanizmlar haqida tushunchaga ega bo'ldi. Bu nazariyalar
IgG ning Z: Fc kompleksi uchun bu erda Z Z: ZSPA-1 da bo'lgani kabi bir xil bog'lovchi sirtdan foydalanadi. Z.ning strukturaviy tahlillari
Z domenining muhandisligi. Affibody-maqsadli protein komplekslari oqsil-oqsil o'zaro ta'sirining strukturaviy va termodinamik
tadqiqotlari uchun yaxshi namunaviy tizimlardir. Boshlanish nuqtasi sifatida Z: ZSPA-1 juftligi bilan biz
oraliq yaqinlikdagi (µM) bog‘lovchi oqsil. Buni 20-70 nM dissotsiatsiya konstantasi bilan solishtirish mumkin
Bog'lanish entropiyasini keyingi tahlil qilish shuni ko'rsatadiki, konformatsion entropiya o'zgarishi aslida kamayadi
kompleksning eritma strukturasini aniqladi va ZSPA-1 ning dastlabki tavsifini o'tkazdi.
oqsil-oqsil o'zaro ta'sirining strukturaviy
va termodinamik murakkabligini, shuningdek, bu murakkablikni
ajratish va tushunish mumkinligini ko'rsatadi. Ushbu tadqiqotda ZSPA-1 ning har tomonlama tavsifi
ZSPA-1 disulfid ko'prigi shakllanishi bilan. Mutantlar termodinamik jihatdan tavsiflangan va bog'langan
yaqinlik (Kd) stafilokokk oqsili A va tegishli ZSPA oqsilidan olingan Z domenidan iborat.
Machine Translated by Google
Asosiy
manbalar
men:
oqsil bilan bog'lovchi A.
Protein Sci. 13: 2078-2088.
Härd T. (2004) ZSPA-1 ning biofizik tavsifi - tanlangan fag-displey
Lendel C*, Wahlberg E*, Berglund X, Eklund M, Nygren PÅ va Xärd T. (2002)
Ushbu tezis matnda rim raqamlari bilan ko'rsatilgan quyidagi nashrlarga asoslanadi.
Lendel C, Dincbas-Renqvist V, Flores A, Wahlberg E, Dogan J, Nygren PÅ va
3190.
vi
A, Berglund H, Nygren PÅ va Härd T. (2003) Maqsadli oqsil bilan kompleksdagi affikor:
Tuzilishi va birlashtirilgan katlama.
Proc Natl Acad Sci US A. 100: 3185-
Wahlberg E va Härd T. (2006) Muhandislangan bog'lovchi oqsilning konformatsion
barqarorlashuvi.
J Am Chem Soc. 128: 7651-7660.
*Ishga teng hissa qo'shadigan qo'shma birinchi mualliflar
Wahlberg E*, Lendel C*, Helgstrand M, Allard P, Dincbas-Renkvist V, Hedkvist
