326
уларнинг ҳар қайси бири ДНК молекулани “таний оладиган” нуклеотидлар
тартиби жойлашган жойидангина уни кесади. Баъзи бир рестриктаза EcoRl
деб белгиланган хиллари ДНКдан ГААТТ ёки ТТААГ нуклеотидлари
таркибидаги аденин ва гуанин жойлашган жойининг орасидан кесади.
Шунинг билан бирга бу фермент кесиб тайёрлаган ДНК қисмлари
учларида бир-бирига комплементар бўлган АА ёки ТТ нуклеотидлари
жойлашган бўлади. ДНК бўлагининг бундай учларини ёпишқоқ учлари деб
номланади. Чунки ДНК бўлаклари ушбу учи билан векторнинг ва у орқали
реципиент организм ДНКсига уланади (илова – 88-расм).
2. Вектор - плазмиданинг ҳалқасимон
ДНКси рестриктаза ферменти
ёрдамида бир жойидан узилиб чизиқли узунчоқ ёйилган шаклга
келтирилади.
3. Рекомбинант (дурагай) ДНК молекулаларини яратиш учун
донордан реципиентга кўчирилиши керак бўлган ген жойлашган ва
жойлашмаган ДНКнинг бўлаклари плазмида
ДНКсига уланиб дурагай
(рекомбинант) ДНК ҳосил қилинади. Бунинг учун донорнинг майдаланган
ДНКси жойлашган эритмага узунчоқ ҳолатга келтирилган плазмида ДНК-
си ҳамда ДНК бўлакларини бир-бирига улайдиган лигаза ферменти
солинади. Бу ферментнинг ёрдамида донорнинг ДНК бўлаклари биттадан
вектор-плазмида ДНКсига уланади. Кейинги босқичда плазмида ДНК
сининг учлари уланиб, уларни яна ҳалқасимон ҳолатга келтирилади. Шуни
ҳам таъкидлаш керакки дурагай ДНКларнинг ичида: а) ҳақиқий
рекомбинантлари яъни донордан реципиентга кўчириш кўзда
тутилган
генга эга бўлганлари; б) бу генга эга бўлмаганлари мавжуд бўлади.
4. Трансгенознинг якуний қисми ўзида донорнинг муайян генига эга
бўлган векторнинг рекомбинант (дурагай) ДНКсини реципиент организмга
киритиш ва унинг ДНКсига кўчирилаётган генни улаш ва унинг ўз
функциясини нормал бажаришини таъмин этишдан иборат. Бунинг учун:
а) дурагай ДНКга эга бўлган вектор - вируслар реципиент бактериялари
танасига киритилади; б) реципиент бактериялар танлаб ажратиш муҳити
шароитида ўстирилади. Селектив муҳит реципиент бактерияларнинг
ўсиши учун махсус тайёрланган озиқа модда бўлиб
унга ушбу бактерия
штамми чидамсиз бўлган антибиотик ёки пестицид қўшилади. Эслатиб
ўтамиз, донор бактерия ушбу антибиотик ёки пестицидларга чидамлилик
генига эга; в) селектив муҳит шароитида геномига реципиентнинг
чидамлилик гени донорнинг ДНКсига уланган бўлса у
бактериялар нобуд
бўлмайдилар, яшаб кўпайишлари мумкин. Демак, унинг геномига вектор -
плазмиданинг ҳақиқий рекомбинант ДНКдаги реципиентнинг муайян
антибиотик ёки пестицидга чидамлилик гени ўтган. Қолган бактериялар,
жумладан донорнинг баён этилган гени йўқ ДНК қисмлари билан олинган
дурагай ДНК ўтган бактерияларнинг ҳаммаси нобуд бўлиб кетади; г)
нобуд бўлмай яшаб қолган бактерияларни кўпайтириш жараёнида
рекомбинант ДНК молекуласи ва ундаги трансгеноз қилинган ген
кўпайтирилади. Чунки уларда репликация намоён бўлади. Шундай йўл
327
билан бу молекулалар клонлаштирилади (кўпайтирилади). Юқорида баён
этилган трансгеноз натижасида муайян антибиотикка ёки пестицидга
чидамлилик
гени
донор
бактериялардан
реципиент
бактерияга
рекомбинант ДНК молекулалари орқали ўтказилди яъни
Do'stlaringiz bilan baham: