Литература для студентов фармацевтических институтов Технология лекарственных форм в двух томах том 2


Глава 19 ФЕРМЕНТЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СИНТЕЗА. ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ



Download 3,8 Mb.
bet210/239
Sana22.02.2022
Hajmi3,8 Mb.
#117615
TuriЛитература
1   ...   206   207   208   209   210   211   212   213   ...   239
Bog'liq
ivanova l a red tehnologiya lekar

Глава 19
ФЕРМЕНТЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СИНТЕЗА. ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ

19.1. ФЕРМЕНТЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СИНТЕЗА (ФЕРМЕНТЫ, СИНТЕЗИРУЕМЫЕ МИКРООРГАНИЗМАМИ)


Получение ферментов из культур микроорганизмов является перспективным ввиду неограниченной доступности исходного сырья - бактерий, грибов и актиномицетов. Большие возможности открываются при отборе и искусственном мутагенезе продуцентов для направленного биосинтеза определенных ферментов. Биосинтетические методы отличаются высокой производительностью за счет способности микроорганизмов к интенсивному размножению. Известны бактерли, которые делятся каждые 30-60 мин, в результате чего происходит быстрое накопление целевых продуктов в биомассе или культуральной среде. Поэтому, несмотря на ряд лимитирующих факторов, методы биотехнологии являются экономически более эффективными, чем методы получения биологически активных веществ из дорогого и дефицитного животного сырья.
Биотехнологический процесс включает большую подготовительную работу: очистку и стерилизацию воздуха, посуды и аппаратов; подготовку питательной среды для биосинтеза и ее стерилизацию; выращивание посевного материала исходной культуры. Засев производственной питательной среды и выращивание микроорганизмов (продуцентов ферментов) проводят в ферментаторе. Культивирование микроорганизмов осуществляют в основном глубинным способом в жидкой питательной среде при строго определенном значении рН, времени и температуры, подавая стерильный воздух.
Большинство ферментов промышленного производства относится к внеклеточным, поэтому накапливаются в культуральной жидкости, что значительно упрощает их выделение (схема 19.1). Культуральную жидкость отделяют от частиц мицелия фильтрованием через синтетические ткани, применяемые в пищевой промышленности и обладающие механической и химической прочностью. С целью улучшения процесса фильтрации используют дополнительный фильтрующий слой из материалов, имеющих высокие гидродинамические свойства - перлит, уголь активированный и др. Для повышения качества фильтрата по цветности и прозрачности применяют соосажде-ние мелкодисперсных взвешенных частиц мицелия и высаливание балластных веществ аммония сульфатом. Осветление растворов проводят микрофильтрацией через мембраны с диаметром пор от 0,45 до 0,8 мкм. Снижение микробной контаминации осуществляют стерильной фильтрацией через мембраны с диаметром пор от 0,1 до 0,3 мкм.

СХЕМА 19.1. Технология ферментов, получаемых биотехнологическими методами



При выделении изоферментов (внутриклеточных) основной задачей является сбор клеток, содержащих фермент, с последующей их промывкой буферным раствором. Наилучшие результаты отделения клеток обеспечивает микрофильтрация через мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм. Осуществляют ее в тангенциальном потоке, при котором фильтруемая жидкость подается под небольшим углом к поверхности мембраны, что позволяет постоянно смывать слой частиц, образующихся на ее поверхности. Его удаление происходит также за счет высокой скорос ги подачи исходного раствора в фильтрующую систему. Таким путем удается переработать большие объемы растворов и получить высококонцентрированные суспензии.
Следующей стадией выделения внутриклеточных ферментов, (например, аспарагиназы, пенициллиназы) является разрушение клеток путем механической, гидродинамической или ультразвуковой дезинтеграции или лизиса с помощью ферментов и другими способами. Очищают растворы микрофпльтрацией через мембранные фильтры с размером пор 0,22 мкм. Так как целевым компонентом является фильтрат, то наряду с фильтрацией в тангенциальном потоке используют и обычную - через патронные фильтры. Из растворов ферменты выделяют фракционированием нейтральными солями и растворителями, а также изо-электрическим осаждением.
Одним из прогрессивных методов очистки является ультрафильтрация, позволяющая проводить разделение в соответствии с размером молекул или молекулярной массой веществ.ч Основной характеристикой ультрафильтрацпонной мембраны является средний предел полного деления частиц глобулярного белка, которые не проходят через мембрану. Наличие широкого набора мембран с пределами отсечения от I тыс. до 1 млн дальтон (обычно I, 10, 30 тыс. и 1 млн) позволяет отделять различные примеси, очищать, концентрировать и обессоливать целевой продукт. Ультрафильтра цпя осуществляется о тангенциальном потоке, обессоливапне или удаление низкомолекулярных примесей (м.м. ниже предела деления мембраны) - в режиме днафильтрации, т. е. при постоянном объеме фильтруемой жидкости, за счет восполнения фильтрата равным объемом воды или буферного раствора.
Важную роль в технологии выделения и очистки ферментов играют хроматографическис методы. Они включают гель-фильтрацию или эксклюзионную хроматографию, когда время выхода вещества из хро-матографической колонки зависит от размера его молекул или молекулярной массы (более крупные молекулы не входят в поры сорбента и элюнруются раньше); ионообменную хроматографию, разделение при которой основано на различиях в суммарных зарядах присутствующих веществ при данном значении рН
(вещества, имеющие большой заряд, удерживаются сильнее и элюируются позже); обращенно-фазовую или гидрофобную хроматографию, при которой гидрофобные вещества сильнее связываются с поверхностью сорбента и элюируются позже. При очистке ферментов используют один или несколько из указанных методов хроматографического разделения.
Перспективной для выделения и очистки ферментов является аффинная хроматография, разделение с помощью которой основано на том, что один из компонентов смеси обладает повышенной способностью к связыванию с лигандом, присоединенным ковалент-ной связью к инертному носителю. При пропускании смеси белков или культуральной жидкости через колонку, заполненную таким сорбентом, молекулы соединения, обладающие сродством к лиганду, удерживаются в колонке, в то время как другие выходят из нее. Вещество из колонки селективно элюируют с помощью буфера, содержащего лиганд или его аналог, иногда с добавлением какого-либо растворителя.
Препараты ферментов микробиологического синтеза. Террилитин (Terrilytinum) -препарат содержит очищенный протеолитический фермент, получаемый из культуры плесневого гриба Aspergillus terri-cola. Он первый лекарственный микробный фермент, освоенный в 1976 г. отечественной промышленностью по разработкам Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения (ВНИТИАФ). Подобно большинству белковых препаратов микробного происхождения является комплексным препаратом, представленным тремя протеазами, из которых основное содержание, около 90%, составляет протеаза-1. Молекулярная масса террилитина 26 800, область стабильности при значении рН 4,0-9,0.
Террилитин представляет собой лиофилизирован-ный порошок или пористую массу белого цвета, легко растворим в воде, значение рН I% водного раствора 4,8-6,5; активность, выраженная в протеоли-тических единицах (ПЕ), должна быть не менее 2 в 1 мг. Препарат выпускают в герметически укупоренных флаконах по 200 ПЕ, хранят по списку Б, в сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 4°С. Применяют наружно и в виде ингаляций для расщепления гнойных экссудатов, некротических тканей, при лечении гнойных ран, ожогов, заболеваний верхних дыхательных путей.
Ораза (Orazum)-содержит комплекс амило-литических (амилазы, мальтазы) и протеолитическпх ферментов, получаемых из культуры гриба Aspergillus oryzae. Препарат представляет собой аморфный порошок от светло-желтого до темно-желтого цвета, растворимый в воде, устойчив в интервале значений рН 2,5-9,0. Для медицинских целей его получают из технического продукта амилоризина-ПХ, высушенной и измельченной поверхностной культуры плесневого гриба Aspergillus oryzae, извлеченной водной экстракцией с последующей фракционной очисткой органическими растворителями. Выпускают препарат в форме гранул по 100 г в стеклянных банках. Хранят в сухом, прохладном месте. Применяют при расстройствах пищеварения, протекающих с угнетением функции пищеварительных желез.
Солизим (Solizymum) -ферментный препарат л и политического действия, полученный из культуры гриба Penicillium solitum. Он представляет собой гигроскопический порошок светло-коричневого цвета со слабым специфическим запахом, мало растворимый в воде и практически нерастворимый в этаноле, хлороформе, эфире. Область стабильности при значении рН 6,5-9,5. Активность препарата определяют по способности гидролизовать эмульсию масла оливкового и выражают в ЛЕ (липолитических единицах).
Солизим выпускают в таблетках с содержанием 20 000 ЛЕ. Таблетки получают гранулированием со-лизима и сахара 5% раствором ПВП в хлороформе в установке с псевдоожижением вещества, сушат при температуре не выше 40°С, покрывают оболочкой из ацетилфталилцеллюлозы в спирто-ацетоновом растворе с добавлением красящих веществ. Благодаря оболочке таблетки выделяют фермент лишь в верхних отделах кишечника. Хранят в сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 4°С. Применяют при хронических заболеваниях желудочно-кишечного тракта и панкреатитах.
Стрептолиаза (Streptoliasum) - препарат, содержащий фермент стрептокиназу, получаемый из культуры ^-гемолитического стрептококка группы С. Лиофиллизированный препарат представляет собой пористую массу белого цвета, легко растворимую в воде. Активность стрептолиазы выражают в ЕД. За ЕД принимают количество, лизирующее в определенных условиях сгусток фибрина, образованный смесью растворов фибриногена и тромбина. Выпускают в ампулах по 250 000 и 500 000 ЕД. Хранят при температуре от 4 до 10°С. Применяют в качестве фибрпно-литпческого (тромболитического) средства. Недостатком является малая стабильность в организме: период полураспада стрептокипазы составляет 20-80 мим, ввиду чего препарат вводят внутривенно (в необходимых случаях - внутриартериально) капельно на протяжении 16-18 ч. Высокая иммунная активность является причиной побочных эффектов (озноб, лихорадка, аллергические реакции). Препарат стрептокипазы, лишенный указанных недостатков, получен ее иммобилизацией на водорастворимой полисахаридной матрице (см. стрептодеказу).
А с п а р а г и 11 а з a (Asparaginasum) - L-acna-рагипаза (L-аспарагин-аминогидролаза) - фермент, расш.епляющпй аспарагин на кислоту аспарагииовую и аммиак. Продуцируется разными штаммами кишечной палочки (Escherichia coli). Технология парентерального препарата L-аспарагнназы из Е. coli разработана совместными исследованиями Института органического синтеза (ИОС) АН Латвийской ССР и ВНИИ антибиотиков. Он представляет собой белый аморфный порошок, легко растворимый в воде и изотоническом растворе нагрия хлорида. В качестве стабилизатора содержит глицин. Активность выражается в международных единицах действия (ME). За МЕ принято количество фермента, освобождающее 1 мкмоль аммиака из аспарагина за 1 мин. Препарат выпускают в -лиофилизированном виде во флаконах, содержащих по 3000 и 10 000 ME L-аспарагииазы для инъекций. Хранят по списку Б, при температуре не выше 10°С. Применяют при лечении острой лимфо-бластической лейкемии. Действие основано на том, что некоторые опухоли и лейкемические клетки не синтезируют аспарагин и поэтому нуждаются в его поступлении извне, например с пищей. Введение L-аспарагиназы позволяет искусственно ограничить поступление в опухоли указанной аминокислоты и подавляет их рост.
П е н и ц и л л и н а з a (Penicillinasum) - ФеР~ мент, продуцируемый Bacil lus lecheniformis штамм
749/с. Представляет собой белый аморфный гигроскопический порошок, легко растворимый в воде. Активность препарата выражается в ЕД. За ЕД принимают его наименьшее количество, способное инактивировать 10»' моля (около 60 ЕД) бензил-пенициллина в 1 мл фосфатного буфера в течение 1 ч при температуре 37°С. Препарат выпускают в герметически укупоренных флаконах или ампулах по 500 ООО и 1 ООО ООО ЕД. Хранят при комнатной температуре. Применяют при острых аллергических реакциях и анафилактическом шоке, вызванных препаратами группы пенициллина.

Download 3,8 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   206   207   208   209   210   211   212   213   ...   239




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©hozir.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling

kiriting | ro'yxatdan o'tish
    Bosh sahifa
юртда тантана
Боғда битган
Бугун юртда
Эшитганлар жилманглар
Эшитмадим деманглар
битган бодомлар
Yangiariq tumani
qitish marakazi
Raqamli texnologiyalar
ilishida muhokamadan
tasdiqqa tavsiya
tavsiya etilgan
iqtisodiyot kafedrasi
steiermarkischen landesregierung
asarlaringizni yuboring
o'zingizning asarlaringizni
Iltimos faqat
faqat o'zingizning
steierm rkischen
landesregierung fachabteilung
rkischen landesregierung
hamshira loyihasi
loyihasi mavsum
faolyatining oqibatlari
asosiy adabiyotlar
fakulteti ahborot
ahborot havfsizligi
havfsizligi kafedrasi
fanidan bo’yicha
fakulteti iqtisodiyot
boshqaruv fakulteti
chiqarishda boshqaruv
ishlab chiqarishda
iqtisodiyot fakultet
multiservis tarmoqlari
fanidan asosiy
Uzbek fanidan
mavzulari potok
asosidagi multiservis
'aliyyil a'ziym
billahil 'aliyyil
illaa billahil
quvvata illaa
falah' deganida
Kompyuter savodxonligi
bo’yicha mustaqil
'alal falah'
Hayya 'alal
'alas soloh
Hayya 'alas
mavsum boyicha


yuklab olish