Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Определение оксидазы. Наносится культура микроба на диск с фенилендиамином. Если есть оксидаза, она окисляет фенилендиамин и бумага окрашивается в синий цвет.
Окислительно-ферментативный тест на использование глюкозы (тест Хью — Лейфсона).
Готовят основной раствор исследуемого углевода (обычно глюкозы), стерилизуют его путем фильтрования (или в автоклаве при 0,5 атм) и добавляют с соблюдением правил асептики при 40 — 50⁰в автоклавированную полужидкую основную среду до конечной концентрации 0,5 — 1%. Чаще всего используют основную среду Хью и Лейфсона (г/л): пептон — 2; NaCl— 5; К₂НРО₄— 0,3; бромтимоловый синий — 0,03; агар — 3; вода дистиллированная.
Если микроорганизмы не способны расти на этой среде из-за недостатка необходимых питательных веществ, добавляют дрожжевой экстракт (0,1%) или сыворотку крови (2%). Когда кислотообразование маскируется веществами щелочной природы, образующимися из пептона, можно использовать среду следующего состава (г/л): NН₄Н₂РО₄— 1,0; KC1 — 0,2; MgSO₄— 0,2; дрожжевой экстракт — 1,0; бромтимоловый синий — 0,03; вода дистиллированная; агар — 2,0; рН среды 7,0. В случае, когда рост тестируемого организма ингибируется бромтимоловым синим, следует заменить его феноловым красным или бромкрезоловым пурпурным.
Для осуществления теста пробирки с полужидкой средой, содержащей углеводы, помещают на несколько минут в кипящую водяную баню для удаления большей части растворенного кислорода, затем их быстро охлаждают и столбики среды инокулируют микробиологической петлей. После инокуляции среду в одной из пробирок покрывают слоем 10 мм стерильного минерального масла (так называемая «анаэробная» пробирка). Среду во второй пробирке ничем не покрывают («аэробная» пробирка). Для выявления неспецифических реакций готовят контрольные пробы: 1) инокулируют такую же среду, не содержащую углевода; 2) инкубируют стерильную среду с углеводом. Результаты интерпретируют следующим образом.
1. Если кислота образуется только в аэробной пробирке, то клетки катаболизируют углевод с использованием О₂ (реакция О). В этой пробирке рост должен быть заметным.
2. Если подкисление происходит и в аэробной и в анаэробной пробирках, то клетки способны также к брожению (реакция F). Рост должен быть заметен в обеих пробирках.
3. Если кислота не образуется ни в одной пробирке, то клетки не способны катаболизировать углевод. Если рост отсутствует, то возможно, что в среде нет какого-либо питательного вещества, необходимого для роста изучаемого организма.