Лабораторные работы по предмету микробиология, вирусология и иммунология

Р еакциядля индола. Эрлиха реакция (P. Ehrlich) — реакция для определения индола. Способность некоторых видов микроорганизмов к индолообразованию используется для дифференциальной микробиологической диагностики. В результате жизнедеятельности бактерий пептон питательной среды распадается на аминокислоты, одна из которых (триптофан) под влиянием триптофаназы расщепляется на индол, пировиноградную кислоту и аммиак. Для обнаружения индола чаще всего пользуются реакцией Эрлиха в модификации Беме (A. Bohme), позволяющей обнаружить индол даже в разведении 1:1 000 000. В основе этой реакции лежит способность бесцветного индола в присутствии окислителя (персульфата калия) образовывать с парадиметиламинобензальдегидом комплексное соединение красного цвета. По Фишеру (Е. Fischer), в результате реакции объединяются две молекулы индола с одной молекулой парадиметиламинобензальдегида и выделяется одна молекула воды.
Итак, реакция Эрлиха — цветная реакция на индол, который образуется за счет разложения бактериями триптофана. Реакция Эрлиха применяется для дифференциальной диагностики в микробиологии: образуют индол (реакция Эрлиха положительная) бактерии Escherichia coli, Proteus, холероподобные вибрионы и некоторые другие; не образуют индол (реакция Эрлиха отрицательная): сальмонеллы (включая бактерии брюшного тифа и паратифов), шигеллы и многие др.
Индол, реагируя с диметиламинобензальдегидом, образует соединение, окрашенное в красный цвет. Реакцию проводят следующим образом: в бульонную культуру бактерий вносят 1—2 мл эфира, хорошенько встряхивают и осторожно по стенкам пробирки приливают 2 мл раствора № 1 (4 г р-диметиламинобензальдегида + 380 мл 96% этилового спирта + 80 мл концентрированной соляной кислоты) и 2 мл раствора № 2 (насыщенный раствор персульфата калия). В том случае, если не позднее чем через 5 минут эфирный слой розовеет, если осторожно вливать, то появляется розовое кольцо - реакция считается положительной.
Определение каталазы. Для определения каталазной активности на предметное стекло наносится капля 3%-ного раствора перекиси водорода, вносится в нее петля исследуемой агаровой или бульонной культуры бактерий и тщательно перемешивается. При положительной реакции (наличии каталазы) перекись водорода будет разлагаться с образованием воды и выделением кислорода в виде пузырьков.