Лаборатория мавзулари 1, 2, Вирусларни юқтириш усуллари

20-лаборатория иши
Картошканинг X—вируси РНК сини тузлар ёрдамида
ажратиш
Юқори ион кучига эга эритма ёрдамида вирус вирионларини парчалаб РНК ажратиш энг осон усуллардандир.
Бу усулни ижобий томони бир вақтни ўзида ҳам оқсил, олиш мумкинлигидадир.
Керакли материаллар: асбоб—ускуналар; совутгичли центрифуга. Реактивлар.1M CaCl₂ёки BaCl₂ O_,Ol M ЭДТA ли 0,01 M трис —HCl буфери ва 0,001% натрий додецид сулъфати (pH 7,5): KXB нинг (10 — 30 мг/мл) тоза препарат»
Ишнинг бориши.KXB нинг совутилган тоза препаратига тенг ҳажмда 1 M CaCl₂(ёки BaCl₂) қуйилади ва яхшилаб аралаштирилади, сунгра +2°С ли совутгичга қўйилади Шу муддатда KXB нинг вириони парчаланади. Вирус РНК Cl кальций (ёки барий) нуклеати сифатида ажралиб чиқади РНК чукмаси 15 минут давомида минутига 6000 айл. тезлигида цендентрифугаланиб ажратиб олинади, чўкма устида қолган оқсилдан кейинчалик вирус оқсили тозаланади.
РНК ни эритиш учун нуклеат кальций чўкмасига 5 мл 0,01M ЭДТА 0,01 M трис —HCl ва 0,001 % натрий додецил сульфат (pH 7,5) қуйилади.
Хелатловчи агент бўлган ЭДТА Са ионларини боғлаб РНК ни эритмага ўтказишда ишлатилади. Натрий додецил сулъфати эса нуклеаза активлигини ингибитори ҳисобланади.
Аралашма 30 минут совутгичда сақланади, сунгра центрифугаланади (15 мин. 6000 айл.тез.), чўкмага буфер эритмасидан солинади. Экстракция 3 марта қайтарилади. Учала экстракцияда ажратилган сувли кием бирлаштирилади, 3 M ацетат буферидан солинади (pH 5,0) ва РНК ни аввал этанол ва сунгра LiCl билан чўктирилади (юқоридаги машғулотдагидек).


21-22- лаборатория иши
Киритмалар усули ёрдамида фитопатоген вирусларни диагностика қилиш
Ишдан мақсад: "Вирус киритмалари" усулини ўрганиш ва айникса бу усул ёрдамида яширин симптомли вирус касалликларини аниқлашдир.
Реактивлар: фуксин, пикрин кислота, Ir^O, кедр мойи. Асбоб — ускуна: микроскоп х10, х40, х90 объективлари, буюм ойнаси, қоплагич ойна, шиша тайёкча.