Лаборатория мавзулари 1, 2, Вирусларни юқтириш усуллари

14- лаборатория иши


Тоза вирус препаратини олиш йўлларини ўрганиш
Ишдан мақсад. Ҳар хил тезликда моддаларни чўкмага тушишига асосланиб вирусларни тоза препаратини олиш усули билан таништириш.
Керакли материаллар. Центрифуга ва унинг роторлари, пробиркалари, шприц ва вирус тозалашнинг бошқа методларида ишлатилган материаллар.
Ишнинг бориши. Центрифуганинг яхшилаб ювилиб қуритилган пробиркаларига вирусли эритма ( аввалги машғулотдаги қисман тозаланган вирусли намуна) цен­трифуга қопқоғидаги қараш тешикчасигача қуйилади, сўнгра пробиркалар тарози ёрдамида тенглаштирилади ва қопқоқлар аввал қўл билан, сўнгра махсус "калит-мослама" билан ёпилади. Пробиркаларнинг тенглиги қайта торозида текширилади, сўнгра бурама қопқоқлари билан герметик ёпилади (агар пробиркаларнинг бири оғирроқ бўлса, баробарлаштириш учун шприц ёрдамида эритмадан қўшилади).
Пробиркалар центрифугани роторига бир-бирига қарама-қарши қилиб қўйилади. Ротор зич қилиб қопқоқ билан ёпилади ва центрифуга камерасига жойлаштирилади . Центрифугалаш 90 минут давомида 105 000 g да олиб борилади.Центрифуга тўхтагандан сўнг, ротордан пробиркаларни чиқариб олинади, пробирканинг энг тагида озгина жигарранг вирус чўкмаси ва чўкма усти суюклиги кузатилади. Чўкма усти суюқлигини тўкиб ташланади, вирус чўкмасини эса озгина 0,01 М трис-HCl буферида (рН-7,6) эритилади. Агар вирус яхши тозаланган бўлса оқ-ҳаворанг "опалесценция" кузатилади. Эритмани 15-18 минг айл./тезлигида центрифугаланади ва эримаган қисмидан ажратилади. Эримаган чўкмани яна бир марта 1-2 мл буферда эритиб, чўктириб, чўкмаусти суюқлигини асосий вирус эритмасига қўшилади ва сақланади.
Шу дифференциал центрифугалаш циклини 3 - 4 марта қайтариб етарлича тозаланган вирус препарата олинади. Вирусларнинг ўлчамлари (10-600 нм) ва зичликлари шундайки, агар улар марказдан қочма кучини 30000 дан
200000g таъсир эттирилса, вирус зарралари чўкмага тушади. Шу мақсадда центрифугаларнинг роторларини минутига 50000 — 60000 марта айланадиган центрифугалари ишлатилади.
Дифференциал центрифуга усулида вирус тозалаганда вирусни суспензиядан чўктирилади, бошқатдан суспензия ҳолатига ўтказилади, совуқда магнит айлантиргичида чайқатилади ҳамда паст тезликда центрифугаланади (6000 g, 30 мин). Бу жараённи бир неча марта қайтариш мумкин.
Ҳайвон вирусларини, бактериофагларни бир цикл дифференциал центрифугалаш билан тозалаш қийин бўлади. Бунда аввал ҳар хил усулларда (м., ионалмашиш хроматографияси) вирус тозалаш босқичларидан ўтиб, вирусни катта ҳажмли суюкликдан кичик хажмга ўтказишда ишлатилиши мумкин. Ўсимлик вирусларини тозалагида бу метод яхши самара беради.
тоза препарат олишдир.