Сборник материалов всероссийской научно-практической конференции с международным участием

Выводы: 
1.
Наиболее перспективными для включения в состав иммуносорбента для ИФА 
набора реагентов при диагностике токсоплазмозменной инфекции у человека являются 
два рекомбинантных белка: P29 (GRA7) и P30 (SAG1). 
2.
Белок P29 (GRA7) не имеет аналогов по показателю диагностической 
эффективности при выявлении у пациентов раннего токсоплазмоза. 
3.
Создание ИФА тест-системы с использованием одного или двух ранее 
указанных белков, как ожидается, будет показывать результаты, согласующиеся по 
параметрам чувствительности и специфичности с выпускаемой в настоящее время 
системой (ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск Московской области) не более чем на 80%. 
ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ P. AERUGINOSA И 
ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ 
 
Зимина Е.М., Калошин А.А., Михайлова Н.А. 
ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова, г. Москва 

---

78 
Рsеudоmоnаs аеruginоsа
(синегнойная палочка) вызывает гнойно-воспалительные 
заболевания различной локализации и степени тяжести, наиболее часто у пациентов 
ожоговых стационаров и больных с иммунодефицитами различного происхождения (ВИЧ, 
онкологические 
заболевания, 
наследственные 
патологии 
и 
т.д.). 
Широкое 
распространение инфекция получила благодаря неприхотливости возбудителя в 
отношении условий внешней среды, а мультирезистентность микроорганизма к 
антибиотикам и наличие множественных факторов патогенности обуславливают 
трудности для традиционного лечения с использованием антибактериальных препаратов 
даже последнего поколения. В связи с этим, задача разработки специфических 
иммунобиологических препаратов приобретает острую актуальность. При этом особую 
значимость имеют исследования по созданию вакцин на основе протективных антигенов 
возбудителя, полученных с использованием генно-инженерных методов.
Цель исследования – получение слитых рекомбинантных белков OprF-aTox и OprF-
aTox-OprI и исследование их иммунобиологических свойств. 
В ранее полученную в лаборатории протективных антигенов НИИВС им. И.И. 
Мечникова 
плазмидную 
конструкцию, 
кодирующую 
аминокислотную 
последовательность рекомбинантного анатоксина, перед геном 
atox
по сайту рестрикции 
Hind
III был встроен ген 
oprF
. Данная плазмидная конструкция служила для синтеза 
слитого белка OprF-aTox. С целью получения рекомбинантного белка OprF-aTox-OprI в 
эту 
же 
плазмидную 
конструкцию 
по 
сайту 
рестрикции 
Xho
I 
встроили 
амплифицированный ген мембранного белка I. Обе рекомбинантные конструкции 
использовали для трансформации клеток 
E.coli
с последующей наработкой и очисткой 
рекомбинантных белков на Ni-активированном сорбенте.
Очищенные рекомбинантные белки OprF-aTox (расчетная молекулярная масса 105 
кДа) и OprF-aTox-OprI (расчетная молекулярная масса 107,2 кДа) специфически 
реагировали с кроличьими иммунными сыворотками к OprF, анатоксину и белку OprI (в 
случае с OprF-aTox-OprI).
Для исследования протективных свойств рекомбинантные белки, сорбированные 
на гидроокиси алюминия, вводили мышам внутрибрюшинно, двукратно с двухнедельным 
интервалом. Через 14 дней после последней иммунизации животных заражали живой 
вирулентной культурой 
P. aeruginosa
штамма PA103 и в течение 10 дней регистрировали 
гибель животных. По полученным данным рассчитывали ЛД
50
и индекс эффективности 
(ИЭ). ИЭ слитого рекомбинантного белка OprF-aTox-OprI составлял 3,48 при ЛД
50
53,59 
млн микробных клеток (м.к.) и превышал ИЭ рекомбинантного белка OprF-aTox (2,64, при 
ЛД
50
40,61 млн м.к.). 

---

79 
Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение дополнительного 
антигена повышает протективные свойства препарата по показателям ЛД
50
и ИЭ. 
УДК 615.453.64