Выводы:
1.
Наиболее перспективными для включения в состав иммуносорбента для ИФА
набора реагентов при диагностике токсоплазмозменной инфекции у человека являются
два рекомбинантных белка: P29 (GRA7) и P30 (SAG1).
2.
Белок P29 (GRA7) не имеет аналогов по показателю диагностической
эффективности при выявлении у пациентов раннего токсоплазмоза.
3.
Создание ИФА тест-системы с использованием одного или двух ранее
указанных белков, как ожидается, будет показывать результаты, согласующиеся по
параметрам чувствительности и специфичности с выпускаемой в настоящее время
системой (ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск Московской области) не более чем на 80%.
ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ P. AERUGINOSA И
ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
Зимина Е.М., Калошин А.А., Михайлова Н.А.
ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова, г. Москва
78
Рsеudоmоnаs аеruginоsа
(синегнойная палочка) вызывает гнойно-воспалительные
заболевания различной локализации и степени тяжести, наиболее часто у пациентов
ожоговых стационаров и больных с иммунодефицитами различного происхождения (ВИЧ,
онкологические
заболевания,
наследственные
патологии
и
т.д.).
Широкое
распространение инфекция получила благодаря неприхотливости возбудителя в
отношении условий внешней среды, а мультирезистентность микроорганизма к
антибиотикам и наличие множественных факторов патогенности обуславливают
трудности для традиционного лечения с использованием антибактериальных препаратов
даже последнего поколения. В связи с этим, задача разработки специфических
иммунобиологических препаратов приобретает острую актуальность. При этом особую
значимость имеют исследования по созданию вакцин на основе протективных антигенов
возбудителя, полученных с использованием генно-инженерных методов.
Цель исследования – получение слитых рекомбинантных белков OprF-aTox и OprF-
aTox-OprI и исследование их иммунобиологических свойств.
В ранее полученную в лаборатории протективных антигенов НИИВС им. И.И.
Мечникова
плазмидную
конструкцию,
кодирующую
аминокислотную
последовательность рекомбинантного анатоксина, перед геном
atox
по сайту рестрикции
Hind
III был встроен ген
oprF
. Данная плазмидная конструкция служила для синтеза
слитого белка OprF-aTox. С целью получения рекомбинантного белка OprF-aTox-OprI в
эту
же
плазмидную
конструкцию
по
сайту
рестрикции
Xho
I
встроили
амплифицированный ген мембранного белка I. Обе рекомбинантные конструкции
использовали для трансформации клеток
E.coli
с последующей наработкой и очисткой
рекомбинантных белков на Ni-активированном сорбенте.
Очищенные рекомбинантные белки OprF-aTox (расчетная молекулярная масса 105
кДа) и OprF-aTox-OprI (расчетная молекулярная масса 107,2 кДа) специфически
реагировали с кроличьими иммунными сыворотками к OprF, анатоксину и белку OprI (в
случае с OprF-aTox-OprI).
Для исследования протективных свойств рекомбинантные белки, сорбированные
на гидроокиси алюминия, вводили мышам внутрибрюшинно, двукратно с двухнедельным
интервалом. Через 14 дней после последней иммунизации животных заражали живой
вирулентной культурой
P. aeruginosa
штамма PA103 и в течение 10 дней регистрировали
гибель животных. По полученным данным рассчитывали ЛД
50
и индекс эффективности
(ИЭ). ИЭ слитого рекомбинантного белка OprF-aTox-OprI составлял 3,48 при ЛД
50
53,59
млн микробных клеток (м.к.) и превышал ИЭ рекомбинантного белка OprF-aTox (2,64, при
ЛД
50
40,61 млн м.к.).
79
Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение дополнительного
антигена повышает протективные свойства препарата по показателям ЛД
50
и ИЭ.
УДК 615.453.64
Do'stlaringiz bilan baham: |