Сборник материалов всероссийской научно-практической конференции с международным участием

 
Целью 
настоящего исследования явился поиск научной информации и разработка 
подходов для получения новых рекомбинантных антигенов 
T. gondii
с целью их 
последующего использования в составе иммуносорбента (ИС) в ИФА тест-системах для 
лабораторного определения специфических антител у человека.
Материалы и методы:
научные публикации об антигенной структуре возбудителя 
токсоплазмоза, генетические библиотеки данных и сведения о составе уже существующих 
ИФА-наборов реагентов. 
Результаты и обсуждение. 
В доступных для изучения
 
открытых источниках 
литературы особое внимание привлек научный отчет по комплексным исследованиям, 
проведенным сотрудниками компании «Abbott Laboratories» (США) при разработке 
нового набора рекомбинантных антигенов для диагностики токсоплазмоза.
В отчете представлен научный анализ сравнительной диагностической 
эффективности 11 рекомбинантных белков 
T. gondii
, на значительном количестве 
образцов сывороток крови, отражающих все стадии тосоплазмозной инфекции у человека. 
Весь клинический материал был разделен на 4 группы и предварительно 
охарактеризован на наличие IgG и IgМ с помощью ИФА тест-систем (нативный антиген) 
собственного 
производства, 
в 
формате 
высокочувствительного 
прямого 
агглютинационного теста (HSDA) и ИФА тест-системами, основанными на принципе 
захвата антител (табл. 1). 

---

76 
Таблица 1. 
Группа (кол-во) 
Результаты определения 
Заключение (стадия инфекции) 
I (n=200) 
IgM(-), IgG(-) 
Результат отрицательный (здоровы) 
II (n=105) 
IgM(-), IgG(+) 
Результат позитивный (хроническая) 
III (n=89) 
IgM(+), IgG(+), IgА(+) 
Результат позитивный (острая) 
IV (n=53) 
IgM(+), IgА(+), IgG<10 U/ml (+/-) Результат сомнительный 
(сероконверсия) 
Примечание: 
1. Группы I и II – исследованы в непрямой ИФА с тест-системами Abbott IMx Toxo 
IgG и IgM
2. Группы III и IV – исследованы в HSDA для маркеров IgG, в формате ИФА с 
захватом антител класса M и А 
Среди изучавшихся 11 рекомбинантных белков, идентичных нативным белкам 
T. gondii (rp22, rp24, rp25, rp28, rp29, rp30, rp35, rp41, rp54, rp66, rp68), установлено только 
6 антигенов по параметрам чувствительности и специфичности пригодных для включения 
в состав иммуносорбентов для ИФА. Показатели диагностической эффективности этих 
антигенов (клинической чувствительности у больных токсоплазмозом) приведены в 
таблице 2. 
Таблица 2. Эффективность выявления иммуноглобулинов класса G в позитивных 
образцах сыворотки крови, представленных от больных токсоплазмозом 
Рекомбинантный 
белок (антиген) 
Группа 
II, III и IV (n=247) 
II (n=105) 
III (n=89) 
IV (n=53) 
P29 (GRA7) 
206 
71 
87 
48 
P30 (SAG1) 
183 
79 
78 
26 
P35 
173 
39 
88 
46 
P68 
171 
51 
82 
38 
P66 (ROP1) 
146 
23 
78 
45 
P54 (ROP2) 
144 
51 
70 
23 
∑ (соответствие) 
235 (95%) 
95 (90%) 
89 (100%) 
51 (96%) 
Проведенный нами анализ данных, представленных в научном отчете, позволил 
заключить, что наибольшее количество IgG позитивных образцов выявляли антигены: 
Р29 (GRA7) и Р30 (SAG1). При этом показано, что белок Р29 (GRA7) превосходил все 
другие антигены по эффективности выявления раннего токсоплазмоза, а белок Р30 (SAG1) 
имел незначительное преимущество относительно Р29 (GRA7) для детекции хронической 
стадии токсоплазмоза.

---

77 
Примечательно также, что с образцами, полученными от больных с хроническим 
токсоплазменным процессом (группа II), совокупный показатель положительных 
результатов (чувствительность) по 6 антигенам составлял 90% (по отношению к 
результатам, полученным в ИФА с Abbott IMx Toxo IgG); тогда как с образцами, 
полученными от больных в острой стадии или при сероконверсии (группы III и IV) - 100 и 
96% соответственно (в сравнении с высокочувствительным тестом HSDA). Результаты 
исследование образцов III и IV групп с помощью ИФА Abbott IMx Toxo IgG в научном 
отчете авторами не представлены, что позволяет предположить, что они могли быть 
отрицательными. 
В настоящее время ЗАО «ЭКОлаб» осуществляет производственный выпуск 
иммуноферментного набора «ИФА-Токсо-IgG», в котором применяется лизатный 
нативный антиген возбудителя. Клинические испытания указанного набора, проведенные 
с образцами, полученными от больных и здоровых лиц, демонстрируют высокие 
показатели клинической информативности. В то же время на предприятии 
разрабатываются рекомбинантные антигены, аналогичные белкам 
T. gondii,
для их 
использования в структуре иммуносорбентов при линейном иммуноферментном 
блоттинге. Использование моноспецифического белка в структуре иммуносорбента для 
ИФА может понизить диагностический спектр выявляемых антител (до 80% случаев).