Gost 8963-73 Ichimlik suvi. Sanitariya va bakteriologik tahlil usullari

4. Tahlilni o'tkazish.
4.1. Suvdagi bakteriyalarning umumiy sonini aniqlash. Usulning mohiyati 1 sm suvda (24 ± 2) uchun (37 ± 0,5) ° S haroratda ushbu tarkibdagi ozuqaviy agarda o'sishi mumkin bo'lgan mezofil, mezotrofik aeroblar va fakultativ anaeroblarning umumiy miqdorini aniqlashdan iborat. h, 2-5 marta kattalashtirishda ko'rinadigan koloniyalar hosil qiladi.
4.1.1. Oziqlantiruvchi agarar suv hammomida eritiladi va (45 ± 5) ° S haroratgacha soviydi.
4.1.2. Steril Petri idishlari stol ustiga qo'yiladi va ularning qopqoqlariga namuna raqami, ekish sanasi va ekilgan suv hajmi yoziladi.
4.1.3. Plastinalarda 30 dan 300 gacha koloniyalar o'sishi uchun har bir namunani tanlangan kamida ikki xil hajm bilan ekish kerak. Vodoprovod suvini tekshirganda, har ikki stakanga 1 sm dan eking. .
4.1.4. Qog'oz qopqoqlari flakonlardan suv namunasi bilan olib tashlanadi, tiqinlar olib tashlanadi, bo'yinlari alangalanadi, shundan keyin steril pipetka orqali havoni ehtiyotkorlik bilan puflash orqali suv yaxshilab aralashtiriladi.
4.1.5. Steril tayoqcha bilan tegishli hajmdagi suvni oling va qopqog'ini biroz ochib steril idishlarga soling.
4.1.6. 0,1 sm va undan kichik hajmdagi suvlarni ekish uchun tahlil qilingan suvning suyultirilishi qo'llaniladi. Buning uchun sinov qilingan naychaga tahlil qilingan suvning 1 sm3 dan 3.3.1-bandga muvofiq tayyorlangan 9 sm3 steril suv qo'shiladi . Bunday holda, tashqi tomondan bakteriyalarni yuvib yubormaslik uchun pipetkani suv sathidan 3 mm dan oshiqroqqa tushirish kerak. Probirkadagi tarkibni boshqa steril pipetka bilan puflagan havo bilan yaxshilab aralashtirilib, undan 1 sm oling va idishga o'tkazing, bu tahlil qilingan suvning 0,1 sm kubiga to'g'ri keladi . Agar bir xil pipetka bilan kichikroq hajmdagi suvni qoshish zarur bo'lsa , 9 sm steril suv bilan birinchi kolba tarkibidagi tarkibidan 1 sm keyingisiga o'tkazing . Ikkinchi naychadan 1 sm chigit ekish 0,01 sm kubga to'g'ri keladi tahlil qilingan suv va boshqalar.
4.1.7. Petri idishlariga suv qo'shgandan so'ng, unga probirkaning yoki shishaning chekkalarini yondirib, ichiga 10-12 sm sovutilgan ozuqaviy agar agar quyiladi .
Stol yuzasida chashkani ehtiyot bo'lib egiltirib suvni tezda agar bilan aralashtiriladi. Havo pufakchalari, idishning pastki qismining to'ldirilmagan qismlaridan, vositaning qirralariga va idish qopqog'iga tegishidan saqlaning. Shundan so'ng, stakan gorizontal yuzada, vosita soviguncha qoldiriladi.
4.1.8. Agar agar sovugach, ekinlar bilan termostatni teskari tomonga, 3-4 ta chashkadan ko'p bo'lmagan holda joylashtiriladi. O'simliklar (37 ± 0,5) °C da (24 ± 2) soat davomida etishtiriladi.
4.1.9. Ham sirt ustida, ham agar chuqurlikda o'stirilgan koloniyalar 2-5 marta kattalashtiriladigan lupa yoki koloniya hisoblash moslamasi yordamida sanaladi. Buning uchun stakanni teskari qilib qora fon ustiga qo'yiladi. Hisoblashning aniqligi uchun har bir hisoblangan koloniya siyoh yoki shisha siyoh bilan pastki qismida belgilanadi.
4.1.10. Plitka bilan qoplanganda, plastinkada 30 dan 300 gacha koloniyalarga ko'paygan suyultirishni baholang. 1 sm suyultirilmagan namunani payvandlashda istalgan miqdordagi koloniyalarni hisobga oling, ammo 300 dan oshmasligi kerak.
Agar idish ichida eng yuqori suyultirilgan holda 300 dan ortiq koloniya o'sgan bo'lsa va tahlilni takrorlash mumkin bo'lmasa, unda kuchli yonilg'i ostida panjara va kattalashtiruvchi oynali plastinka yordamida koloniyalarni sanashga ruxsat beriladi. Idishning har xil joylarida har biri 1 sm bo'lgan kamida 20 kvadratni hisoblang, so'ngra o'rtacha 1 sm ga o'rtacha koloniyalar sonini chiqaring , ularning qiymati idish maydoniga sm ga ko'paytiriladi , formula bo'yicha hisoblanadi.
4.1.11. Har bir idishdagi koloniyalarni hisoblash natijasi ekilgan hajmni hisobga olgan holda 1 ml tahlil qilingan suvga bakteriyalar sonida ifodalanadi . Yakuniy bakteriyalar soni bu ikkita parallel plastinkada yoki har xil suyultirishda hisoblash natijalarining o'rtacha arifmetik ko'rsatkichidir. Natijalar quyidagicha yaxlitlanadi:
agar natija 1 dan 100 gacha bo'lgan raqamlar oralig'ida bo'lsa, unda olingan raqamlarni yoziladi; agar natija 101 dan 1000 gacha bo'lgan raqamlar oralig'ida bo'lsa, unda natija 10 ga qadar yaxlitlanadi; agar natija 1001 dan 10000 gacha bo'lsa, unda natija 100 ga yaxlitlanadi va hokazo.
4.1.12. Quyidagi holatlarda bitta plastinkaga e'tibor qaratib koloniyalar soni hisobga olinadi: agar payvandlash paytida boshqa plastinkada suyultirish natijasida 20 dan kam koloniya o'sgan bo'lsa; idish-tovoqning butun yuzasiga yoki katta maydonlarga tarqalib, boshqa koloniyalarning o'sishini yashirgan bakteriyalarning sudralib o'sishi bilan; 300 dan ortiq koloniyalar soni bilan.
Ikkala plastinada ham sudralib o'sish qayd etilganda, hisoblash plitasi koloniyalar sonini hisoblash uchun tavsiya etiladi.
Bunday holda, kvadratchalar kubokning doimiy o'sishidan xoli bo'lgan joylari bo'yicha hisoblanadi.
4.1.13. Yakuniy natija tahlil protokoliga yoki jurnalga kiritiladi, unda suv namunasi uchun ilova hujjatidan ma'lumot berilishi kerak. Bundan tashqari, tahlilning maxsus holatlari qayd etiladi (namunaning yaroqlilik muddatidan oshib ketishi, ekinlarning inkubatsiya harorati va vaqtining o'zgarishi, madaniyat vositalarini tayyorlashda o'rnini bosuvchi vositalardan foydalanish va boshqa majburiy og'ishlar).
4.2. E. coli guruhining bakteriyalar sonini aniqlash
E. coli guruhining bakteriyalariga 24-48 soat davomida (37 ± 0,5) ° S haroratda laktoza kislota va gaz hosil bo'lishi bilan ferment beradigan yoki glyukozani kislota va (37 ± 0, 5) ° C da 24 soat davomida gaz va oksidaza faolligiga ega emas.
Suvda E. coli bakteriyalarini aniqlash suvning najas bilan ifloslanishining ko'rsatkichi sifatida qaralishi kerak va ularning soni bu ifloslanish darajasini baholashga imkon beradi.
E. coli guruhidagi bakteriyalar soni membrana filtrlari usuli va fermentatsiya usuli bilan aniqlanadi.
Membranani filtrlash usuli
Usulning mohiyati bakteriyalarni ma'lum miqdordagi tahlil qilingan suvdan membrana filtriga kontsentratsiyalashdan, ularni Endo muhitida (37 ± 0,5) ° C darajasida ko'paytirishdan, o'sgan koloniyalarni farqlashdan va 1 ga E. coli bakteriyalar sonini hisoblashdan iborat. dm3 suv.
4.2.1. Tahlilga tayyorgarlik
Suv ta'minoti tarmog'iga kiradigan suvni va uning eng xarakterli nuqtalarini tahlil qilishda kamida 333 sm3 hajmni tahlil qilish kerak , bu hajmni kamida ikkita filtr orqali filtrlash kerak.
Tozalash bosqichida kamida ikki o'n baravar hajmdagi suv tahlil qilinadi, uning sifatiga qarab filtrlarning birida Escherichia coli guruhi bakteriyalarining 30 dan ortiq koloniyasi o'smaydigan qilib tanlanadi. Bunday holda, xuddi shu nuqtalarda suvning avvalgi tahlillari natijalariga e'tibor qaratish lozim (masalan, birlamchi xlorlashdan keyin suv uchun 10 va 100 sm3 hajmlarni tanlash mumkin ; dezinfektsiyalanmagan suv uchun - 0,1, 1 va 10 sm ).
Sifati noma'lum bo'lgan suvni tahlil qilishda 3-4 barobar hajmda ekish kerak (masalan, 3; 30; 100; suv ta'minoti tarmog'idan 200 sm3 suvni filtrlash mumkin ; tozalash bosqichlari bo'yicha - 0,1; 1; 10; 100 sm2 suv).