Gost 8963-73 Ichimlik suvi. Sanitariya va bakteriologik tahlil usullari

Fermentatsiya usuli
Usulning mohiyati tahlil qilinadigan suvning ma'lum hajmlarini ekish va (37 ± 0,5) ° C darajasida to'planish muhitida o'sishdan iborat, so'ngra zich Endo muhitiga bakteriyalar ekish, o'sgan bakteriyalarni farqlash va eng ko'p bakteriyalar sonini aniqlash E. coli guruhining jadvallari bo'yicha 1 dm suvda.
4.2.14. Tahlilga tayyorgarlik :
a) tozalash va dezinfektsiya qilish bosqichlarida tadqiqot o'tkazilganda 100.0 emlanadi; 10.0; 1,0 va 0,1 sm suv;
b) suv ta'minoti tarmog'iga chiqish joyida va uning eng xarakterli nuqtalarida har biri 100,0 sm bo'lgan uch tom, 10,0 sm va uchta hajmi 1,0 sm bo'lgan uchta jild emlanadi .
4.2.15. 4.2.14-bandda ko'rsatilgan suv miqdori idishning pastki qismiga botirilgan suzuvchi yoki paxta to'plari bilan jihozlangan glyukoza-pepton yoki laktoza-pepton muhiti va indikatori bo'lgan flakonlarga va probirkalarga joylashtiriladi. 100.0 va 10.0 sm3 suv ekish navbati bilan 10.0 va 1.0 sm konsentrlangan muhit bilan flakonlarda va probirkalarda amalga oshiriladi ; 1,0 va 0,1 sm suv ekish - 10,0 sm o'rtacha konsentratsiyali muhitga ega probirkalarga . Emlashlar (37 ± 0,5) ° C da 24 soat davomida inkübe qilinadi. Bu aniqlikning yo'qligi va shisha va probirkalarda kislota va gaz hosil bo'lishi, tekshirilgan suv hajmida E. coli bakteriyasi borligi uchun salbiy natija olish va 24 soatdan keyin tadqiqotni yakunlash imkonini beradi.
4.2.16. Loyqalik, kislota va gaz, shuningdek glyukoza-pepton muhitini ishlatishda loyqalik va kislota yoki laktoza-pepton muhitini ishlatishda loyqalik Endo muhiti yuzasida bo'laklarga bo'linib, bo'lakka sepilgan har bir shishadan. 3-4 sektorga. Emlash izolyatsiya qilingan koloniyalar olinadigan tarzda qabul qilinishi kerak. Qattiq o'sishga erishilganda, emlash izolyatsiya qilingan koloniyalarni ajratish uchun Endo plastinkasiga yoyilishi kerak. Idishlar qopqoqlari bilan termostatni ichiga qo'yiladi va (37 ± 0,5) ° C da 16-18 soat davomida inkubatsiya qilinadi.
4.2.17. Endo muhiti sohalarida kolonial o'sish bo'lmasa, shuningdek, E. coli uchun xarakterli bo'lmagan membranali, gubkali, qirralari va yuzalari notekis, mog'or va boshqa koloniyalar mavjud bo'lganda, salbiy natija olinadi.
4.2.18. Agar loyqalik, kislota va gaz qayd etilgan flakon va probirkalardan ekish paytida Endo muhiti tarmoqlarida metall yaltiroq va u holda (laktoza-musbat) to'q qizil rangli koloniyalar o'sgan bo'lsa, unda ularning bakteriyalariga mansubligi E. coli guruhi mikroskopiya va oksidaz testi bilan tasdiqlangan 3.3.15.1. Smearlarda gram-manfiy tayoqchalarning mavjudligi va manfiy oksidaza testi tahlil qilingan suv hajmida koliform bakteriyalar borligi to'g'risida darhol ijobiy javob berishga imkon beradi. Tozalash bosqichlari bo'yicha suvni tahlil qilish Endo tasdiqlovchi muhitida oksidaza faolligi bo'lmagan gramm manfiy tayoqchalarning to'q qizil rangli koloniyalarining mavjudligi yoki yo'qligi natijalarini hisobga olgan holda yakunlanadi.
4.2.19. Ichimlik suvini tahlil qilishda faqat pushti va rangsiz koloniyalar o'sgan yoki to'q qizil rangli koloniyalar oksidaza musbat bo'lgan tarmoqlar ham hisobga olinadi. Bunda smearlar har bir sektorning ikki yoki uch xil koloniyalaridan tayyorlanadi, ular Gramga bo'yalgan va mikroskop bilan ishlangan, shuningdek 3.3.15.2-bandga binoan oksidaz faolligini tekshirgan.
4.2.20. Agar faqat gram-musbat spora hosil qiluvchi bakteriyalar mavjud bo'lsa, salbiy natija olinadi.
4.2.21. 4.2.17-bandda sanab o'tilganlar bundan mustasno, flakonlardan yoki probirkalardan ekilgan barcha bakteriyalarda faol oksidaza mavjudligi ham salbiy natija olishga imkon beradi. Ushbu holatlarning barchasi tahlil 40-42 soat ichida yakunlanadi.
4.2.22. Oksidaza manfiy, gramm bo'lmagan bo'yash tayoqchalarida o'sishda har bir sektordan har xil turdagi ikki yoki uchta ajratilgan koloniyalar glyukoza bilan yarim suyuq muhitga singdiriladi va (37 ± 0,5) ° da 4-5 soat inkubatsiya qilinadi.
Kislota va gaz ishtirokida ijobiy natija olinadi. Kislota va gaz bo'lmasa, salbiy natija olinadi, tahlil 44-48 soatdan so'ng tugaydi.
Agar faqat kislota mavjud bo'lsa, naychalarni yakuniy hisoblash uchun 24 soatga qoldiriladi. Gaz hosil bo'lmaganda, yakuniy salbiy natija 24 soatdan so'ng olinadi, gaz mavjud bo'lganda ijobiy natija olinadi.
Eslatma. Endo muhitida sinov naychalari va flakonlaridan sut yoki jelatin qo'shib ekishga ruxsat beriladi, bu esa Escherichia coli guruhi bakteriyalarini proteolitik faolligi bo'lgan boshqa suv saprofitlaridan ajratib olishga imkon beradi.
0,2 sm asosli fuksinning spirtli eritmasidan va 0,2 sm rosol kislotasining 5% spirtli eritmasidan tashqari, stakanlarga quyishdan oldin tayyor Endo muhitiga 10 sm steril yog'siz sut quyish mumkin (siz sutdan foydalanishingiz mumkin yorliq uchun retsept bo'yicha tayyorlangan kukun) yoki 100 sm ga 15 sm steril 30% suvli jelatin eritmasi vositasida. Endo vositasini tayyorlashda, keyinchalik sut yoki jelatin bilan qo'shib yuborilgan suvni hisobga olish kerak. Proteolitik faollikka ega mikroblar koloniyalarining atrofida parakazin yog'inlari paytida yog'ingarchilik yoki jelatinli suyultirish paytida depressiyalar (kraterlar) natijasida tozalash zonalari hosil bo'ladi. Ikkinchi holatda, 16-18 soat inkubatsiyadan so'ng, idishlar termostatdan olinadi va kraterlar hosil qilish uchun 20 ° C haroratda yoki muzlatgichda 1-2 soatga qoldiriladi.
Bunday holda, Endo muhitining tarmoqlarida E.coli bakteriyalarining mavjudligi (37 ± 0,5) ° C darajasida glyukozani kislota va gazga fermentlovchi gramm manfiy, sporasiz tayoqchalar koloniyalarini aniqlash bilan baholanadi. va proteolitik faollikka ega emaslar.
4.2.23. Tahlil natijasi koli-indeks (1 dm3 suvdagi E. coli bakteriyalarining eng katta soni) sifatida ifodalanadi , ularning qiymati ilovadagi jadvallardan aniqlanadi. Suv ta'minoti tarmog'iga chiqish va chiqish joyida ichimlik suvini tahlil qilishda koli indekslari ilovaning 1 va 2-jadvallariga muvofiq aniqlanadi. Tozalash va dezinfektsiya qilish bosqichlarida suvni tahlil qilishda Ilovaning 3-jadvaliga muvofiq koli-indeks aniqlanadi.
4.3. Bakteriyalar uchun qo'shimcha testlar - yangi najas bilan ifloslanish ko'rsatkichlari.
Agar suvning bakterial ifloslanishi ruxsat etilgan me'yorlardan oshib ketgan bo'lsa, takroriy namuna olish bakteriyalar mavjudligini qo'shimcha o'rganish bilan amalga oshiriladi - yangi najas bilan ifloslanish ko'rsatkichlari.
Suvdagi yangi najas ifloslanishi xorijiy mikrofloraning ingibitorlari ishtirokida (43 ± 0,5) ° C darajasida laktozani kislota va gazga fermentatsiya qilish qobiliyatiga ega bo'lgan Escherichia coli (asosan Escherichia coli) mavjudligini aniqlash orqali aniqlanadi.
4.3.1 . Membranali filtrlar usuli bilan ishlashda qo'shimcha tadqiqotlar
Agar suvni qayta tekshirganda, filtrlarda E. coli bakteriyalarining metall porlashi (laktoza-musbat) koloniyasi bo'lgan va bo'lmagan to'q qizil rang topilgan bo'lsa, unda koli-indeksni aniqlash bilan parallel ravishda bu koloniyalar (lekin ko'pi yo'q) 15 dan ortiq) laktoza muhitiga borik kislotasi bilan emlanadi, suv hammomida (43 ± 0,5) ° S gacha oldindan isitiladi. Keyin emlangan naychalar hammom bilan birgalikda termostatga o'tkaziladi va (43 ± 0,5) ° S da 24 soat davomida inkubator qilinadi. Bu aniqlik va gazning mavjudligi suvda bakteriyalar mavjudligini ko'rsatadi - yangi najas bilan ifloslanish ko'rsatkichlari. Gaz hosil bo'lmasdan o'sish (loyqalik) belgilari hisobga olinmaydi.
Borik kislotasi bilan laktoza muhiti o'rniga (44,5 ± 0,5) ° S haroratda inkubatsiya qiluvchi porloq yashil, safro-laktoza vositasidan foydalanishingiz mumkin.
4.3.2. Fermentatsiya usuli bilan ishlashda qo'shimcha tadqiqotlar
Agar qayta tekshirilgandan so'ng Endo muhitining sohalarida metall yaltiroqli va bo'lmagan laktoza (laktoza-musbat) to'q qizil rangli koloniyalar o'sgan bo'lsa, unda har bir sektordan ikki yoki uchta bunday koloniyalar borat kislotasi bilan laktoza muhitiga yoki porloq yashil rangga ega safro-laktoza vositasi. Tahlil 4.3.1-bandga muvofiq amalga oshiriladi.
Agar tezlashtirilgan tahlil zarur bo'lsa, o'sish, kislota va gaz hosil bo'lish alomatlari topilgan Endo muhitida to'g'ridan-to'g'ri sinov naychalari va flakonlaridan bu laktoza muhitiga emlash bilan parallel ravishda amalga oshirish mumkin.
Eslatma. Bakteriyalar mavjudligi bo'yicha qo'shimcha tadqiqotlar - yangi najas bilan ifloslanish ko'rsatkichlari nafaqat takroriy, balki suvning sanitariya va bakteriologik xususiyatlarining keskin yomonlashuvi bilan birlamchi tahlillar paytida ham amalga oshirilishi mumkin.
4.3.3. Tahlil protokolida asosiy usullar bilan aniqlangan va suvning najas bilan ifloslanish darajasini, shuningdek bakteriyalar mavjudligini yoki yo'qligini ko'rsatadigan koli-indeks qiymatini - yangi najas bilan ifloslanish ko'rsatkichlarini belgilash kerak. qo'shimcha tadqiqotlar orqali.
4.3.4. Agar Endo muhitining filtrlarida yoki tarmoqlarida rangsiz, shaffof, nozik (kamdan-kam xira) oksidaz-salbiy koloniyalar bo'lsa, ularni ajratish va ularni ichak guruhining patogen bakteriyalariga mansubligini aniqlash uchun o'rganish kerak.