Гипогликемическая активность пробиотиков на модели адренолиновой и алиментарной гипергликемии у крыс. Актуальность

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ


Антагонистическая активность штаммов против типовых штаммов условно-патогенных и патогенных микроорганизмов
Изучена антагонистическая активность Lactobacillus plantarum К2, Lactobacillus plantarum mal, Enterococcus faecium1 и Lactobacillus kunkeei1 против 10 типовых культур патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Исследуемые штаммы проявили высокую антагонистическую активность против Serratia marcescens 367 (от 40 до 22мм), E.coli 002673/477 (от 30 до 25 мм), Pseudomonas аeruginosa 003841/114 (от 35 до 28 мм), Citrobacter freundii (от 29 до 12 мм), B.subtilis (от 38 до 28мм). Штаммы также эффективно подавляли рост S. Aureus D₈ (от 22 до 14 мм), S. aureus 003594/wood 46 (от 25 до 14 мм). (см. табл. 1)

Таблица 1. Спектр антагонистической активности.

Исследуемые штаммы	Диаметр зоны подавления роста индикаторного штамма, мм
	C. freundii, 002801/27	P. aeruginosa 003841/114	S. marcescens 367	L. monocytogenes ATCC 1911	E. coli002673/477	C. albicans	E. faecalis OG1FR	S. aureus 003594/wood 46	B. subtilis	S. aureus D8
Lactobacillus plantarum K-2	29	35	30	23	27.5	15.4±0.31	25	15.8±0.59	28	16
Lactobacillus plantarum мал 1	22,3	28,5	22	30	30	0	0	25	34	22
Enterococcus facium 1	12±0.25	34±0.1	40±0.35	18±0.4	30	8±0.5	0	18	34	18
Lactobacillus kunkeei 1	14±0.30	30±0.22	28	16	25±0.2	10±0.4	0	14	38	14

Устойчивость к различным концентрациям желчи
Все исследуемые штаммы проявили устойчивость к воздействию высокой концентрации желчи (табл.2).
Таблица 2. Устойчивость к различным концентрациям желчи

Культура	контроль	0,2%	0,3%	0,4%	0,6%
Enterococcus faecium1	10^9	1,0 x10^10	4 x10^9	2 x10^9	2 x10^9
Lactobacillus kunkeei1	10^9	1,0 x10^10	1,3 x10^9	1,0 x10^9	1,0 x10^9
Lactobacillus plantarum К2	10^9	2х10^9	8х10^9	3х10^9	11х10^8
Lactobacillus plantarum mal	10^9	24х10^9	40х10^9	32х10^9	13х10^8

Устойчивость исследуемых штаммов к симулированному желудочному соку (рН 2,0) и симулированного
сока тонкого кишечника (рН 8,0)
Известно, что выживаемость МКБ при рН 3,0 в течение 2 часов и при содержании желчи 1 г/л (0,1%) являются оптимальными для пробиотических культур. Время прохождения пищи через желудок составляет 90 минут [18]. С учетом таких физиологических особенностей организма мы установили длительность обработки культур симулированным желудочным соком.
При изучении устойчивости штаммов Lactobacillus plantarum К2, Lactobacillus plantarum mal, Enterococcus faecium1 и Lactobacillus kunkeei1 к симулированному желудочному соку со значением рН–2,0 исследуемые бактерии проявляют разную чувствительность. Так, Lactobacillus plantarum К2 оказался наиболее чувствительным к воздействию кислой среды желудочного сока: после 0 минут обработки СЖС наблюдалось резкое снижение титра живых клеток – на 9 единиц (Таблица 3).
Таблица 3. Устойчивость штаммов к действию симулированного желудочного сока (рН-2,0) и сока тонкого кишечника (рН-8,0)

Культуры	конт	СЖС рН-2			СТК рН-8
		0 мин	60 мин	90 мин	0 ч	1 ч	2 ч	3 ч
Enterococcus faecium1	1 х10^9	3 x10^8	1x10^1	0	2.1 x10^9	4.0 x10^9	3.6 x10^9	3x10^9
Lactobacillus kunkeei1	7 х10^9	2 x10^7	0	0	6 x10^8	7x10^8	6 x10^8	1.1 x10^9
Lactobacillus plantarum К2	1,5 x10^9	0	0	0	3x10^10	10x10^5	2x10^2	-
Lactobacillus plantarum mal	1,1 х10^10	100	50	0	100	100	50	100

Устойчивость штаммов к различным концентрациям NaCl.

Результаты показали, что все культуры устойчивы к наличию в среде 2%, 4% и 6,5% NaCl, титр клеток составил не ниже 10⁷ (Табл. 4).

Таблица 4. Выживаемость культур в присутствии разных концентраций NaCl

Изолят	Концентрация соли в среде МРС
	0%	2%	4%	6.5%
Lactobacillus plantarumь K-2	1.2 х10^9	1.1х10^9	9,6х10^8	7,7х10^8
Lactobacillus plantarum мал 1	2x10^9	1x10^7	3x10^7	4x10^7
Enterococcus facium 1	2x10^9	1x10^9	1x10^9	2x10^9
Lactobacillus kunkeei 1	7x10^9	1,4x10^9	1x10^9	1x10^9

Антибиотикочувствительность исследуемых штаммов
В связи с тем, что отсутствие устойчивости к антибиотикам является одним из требований, предъявляемых к пробиотическим штаммам, проведен анализ чувствительности к антибиотикам, результаты которого представлены в виде диаметра зоны подавления роста, где У-устойчив, УУ-умеренно устойчив, Ч-чувствителен (Таблица 5).

Таблица 5. Чувствительность к антибиотикам исследуемых культур

Антибиотик			Диаметр подавления роста, мм/чувствительность культур к антибиотику
		Содержание препарата в диске, мкг	Lactobacillus plantarum K-2	Lactobacillus plantarum мал 1	Enterococcus facium 1	Lactobacillus kunkeei 1
1	Офлоксацин	5	10/У	0 У	14/УУ	14/УУ
2	Рифампицин	5	30/Ч	31/Ч	18/УУ	30/Ч
3	Хлорамфеникол	30	35/Ч	32/Ч	28/Ч	30/Ч
4	Гентамицин	10	15/УУ	18/УУ	10/У	10/У
5	Эритромицин	15	32/Ч	27/Ч	21/Ч	37/Ч
6	Тетрациклин	30	25/Ч	30/Ч	24/Ч	26/Ч
7	Амикацин	30	10/У	14/УУ	0 У	0 У
8	Цефотаксим	30	35/Ч	31/Ч	20/Ч	16/УУ
9	Линкомицин	15	13/УУ	12/УУ	15/УУ	16/УУ
10	Цефазолин	30	20/Ч	0 У	0 У	0 У
11	Ко-тримоксазол	25	35/Ч	16/УУ	24/Ч	20/Ч

Физиолого-биохимические свойства штамма.
В процессе культивирования микроорганизмы выделяют во внешнюю среду различные протеолитические ферменты, которые можно разделить условно на две группы: в первую группу следует отнести ферменты, принимающие участие в обмене веществ микроорганизмов (дыхании, питании). Они расщепляют углеводы, белки, пептиды, аминокислоты, в результате чего образуются легкоусвояемые микроорганизмами продукты питания и продукты метаболизма – кислоты, перекиси, индол, сероводород и др. Во вторую группу следует включить ферменты, относящиеся к факторам патогенности (например: гиалуронидаза, фибринолизин, плазмокоагулаза, гемолизин, лицитиназа С, лизоцим, нейрамидаза).
Каталазная активность
Lactobacillus plantarum mal, Lactobacillus plantarum К2 являются каталазоотрицательными, а штаммы Enterococcus facium 1, Lactobacillus kunkeei1 – каталазоположительными.
Тест на продукцию лецитиназы
Ни один из исследуемых штаммов не продуцирует лецитиназу.
Тест на гемолизин
Исследуемые штаммы не давали зон гемолиза.
Штаммы Lactobacillus plantarum mal, Lactobacillus plantarum К2, Enterococcus facium 1, Lactobacillus kunkeei1 не продуцирует гемолизины.