Гипогликемическая активность пробиотиков на модели адренолиновой и алиментарной гипергликемии у крыс. Актуальность

Расчет дозы препарата «Глукейр»: принимают 1-2 капсулы 2 раза в сутки. Доза для крыс: (500 мг х 2):70х39(коэф. чел.)/6,0 (коэф.крысы) =100 мг/кг.
Расчет дозы БАДа «Природный инулиновый концентрат»: принимают 2-3 капсулы 2-4 раза в день. Доза для крыс: (800мгх4): 70х39(коэф. чел.)/6,0 (коэф.крысы) =200 мг/кг.
Изучение пробиотических свойств штаммов.
Определение антагонистической активности
Антагонистические свойства Lactobacillus plantarum К2, Lactobacillus plantarum mal, Enterococcus faecium1 и Lactobacillus kunkeei1 определяли методом пятен на агаре [15].
Индикаторными штаммами служили условно-патогенные и патогенные штаммы C. freundii, 002801/27, Pseudomonas aeruginosa 003841/114, Serratia marcescens 367, Listeria monocytogenes ATCC 1911, Escherichia coli 002673/477, Candida albicans, Enterococcus faecalis OGIFR1, Staphylococcus aureus 003594/Wood-46, B. Subtilis, S. aureus D_8. Все индикаторные штаммы хранили путем посева на скошенную МПА-среду в холодильнике при +4^оС. Перед проведением опыта жизнеспособность тестовых культур восстанавливали трехкратным пересевом в бульон с сердечно-мозговой вытяжкой (СМА) (HiMedia, India) и инкубированием при 37^оС в течение 24 часов.
Определение устойчивости к желчи.
Устойчивость испытуемых штаммов к действию желчи определяли по МУК 4.2.2602—10. [16].
Изучение выживаемости штаммов под действием симулированного желудочного сока и симулированного сока тонкого кишечника
Выживаемость штаммов под действием симулированного желудочного сока и симулированного сока тонкого кишечника изучали по методу, описанному в работе Emma K. Call, Yong Jun Goh, et al. (2015).
Исследуемые штаммы выращивали в течение 24 часов (1% инокулята в МРС бульон). Суспензию штаммов приготовили двухкратным промыванием после осаждения центрифугированием и ресуспендированием клеток в 1 мл дистиллированной воды. Состав симулированного желудочного сока: 0,5%-ный раствор NaCl, 0,3% пепсина, рН 2,0. Состав симулированного сока тонкого кишечника: 0,1 г панкреатин и 0,3 г бычья желчь в 100 мл 0,5%-ного раствора NaCl, pH 8,0. Оба раствора стерилизовали проведением через фильтр Зейтца с размером пор 0,22 мкм. 0,2 мл суспензии клеток смешивали с 1 мл свежеприготовленного симулированного желудочного сока. При обработке симулированным желудочным соком (рН 2) через 0, 30 минут, 60 минут и 90 минут и при обработке симулированным соком тонкого кишечника (pH 8) через 0, 1, 2, 3 часа культивирования при 37^оС определяли количество жизнеспособных клеток методом десятикратных разведений в полужидкой МРС-среде. После 48 часов культивирования при 37^оС зафиксировали окончательные результаты опыта.
Изучение влияния повышенных концентраций NaCl на рост культур
Способность исследуемых штаммов к росту при повышенных концентрациях хлорида натрия определяли методом, описанным в МУК 4.2.2602-10 [16].Начало формыКонец формы
Определение чувствительности к антибиотикам.
Для определения чувствительности культур к антибиотикам использовали диско-диффузионный метод, описанный в методическом указании МУК 4.2. 1890-04. Исследуемые штаммы выращивали в МРС-бульоне в течение 24 часов при 37°C. Титр клеток доводили до 10⁷ КОЕ/мл и с помощью палочки с ватным тампоном рассевали на поверхность МРС-агара. Затем диски с антибиотиками размещали на поверхность засеянной среды. Содержание антибиотика в каждом диске составляло: офлоксацина - 5 мкг, рифампицина - 5 мкг, хлорамфеникола - 30 мкг, ко-тримоксазола - 25 мкг, эритромицина - 15 мкг, цефотаксима - 30 мкг, гентамицина - 10 мкг, линкомицина -15 мкг, амикацина - 30 мкг, цефазолина - 30 мкг, тетрациклина - 30 мкг (HiMedia, Индия). Чашки инкубировали при 37^оС в течение 24 часов. Измеряли диаметр зоны отсутствия роста каждой культуры под воздействием антибиотика чувствительность оценивали как устойчивый (У), умеренно-устойчивый (УУ) и чувствительный (Ч) согласно инструкции поставщика. [17].