|
Jarayon
Olingan namuna (maqsadli DNK). Da qizdirilganda denaturatsiyalangan DNK 95 ° C da 5 daqiqa keyin 60 ° C gacha sovutiladi. Astarlar har bir ipga yopishtiriladi (tavlanadi). Primerlar - bu DNKning kengayishi uchun boshlang'ich ketma -ketlikni ta'minlaydigan qisqa DNK iplari. Erkin nukleotidlar va DNK polimeraza qo'shiladi. Polimeraza primerlarga bog'lanadi va erkin nukleotidlar bilan DNKning qo'shimcha zanjirlarini sintez qiladi, natijada DNKning ikki nusxasi hosil bo'ladi. Jarayon taxminan 25 marta takrorlanadi
Termal velosiped
Tovoqlar yuklanmoqda
Kichik PCR naychalaridagi namunalar yuklash tepsisiga solinadi va qopqog'i yopiladi
Haroratni nazorat qilish
Mashinada haroratni tez o'zgartirish uchun isitish va sovutish mexanizmlari mavjud
Pipetani tarqatish
PCR naychalariga DNK namunalarini yuborish uchun bir marta ishlatiladigan uchlari bo'lgan pipetkalar ishlatiladi
DNK miqdorini aniqlash
DNK namunasining miqdori ma'lum hajmni kvant mashinasiga joylashtirish orqali aniqlanadi. Ko'pincha minimal DNK miqdori talab qilinadi
Boshqarish paneli turli xil PCR dasturlarini kompyuter xotirasida saqlashga imkon beradi. Odatda PCRni ishga tushirish faqat bittadan boshlanadi
Jel elektroforezida DNK bo'laklari elektr maydonida harakatlanishini va kattaligiga qarab ajratilishini bildiring.
Jel elektroforezi - bu katta molekulalarni, shu jumladan nuklein kislotalari yoki oqsillarni ajratuvchi usul hajmiga, elektr zaryadiga va boshqa jismoniy xususiyatlarga asoslangan. DNKda a bor ozgina salbiy zaryad negativ elektrod tomonidan qaytariladigan orqa miya fosfatlari tufayli. Qisqa DNK molekulalari oldinga siljiydi, katta molekulalar esa jelga nisbatan ko'proq ishqalanishga duchor bo'ladi. Bo'yalganidan so'ng, har bir bo'lakda ajratilgan molekulalar a guruhlar qatori
Jarayon
Jel matritsasini ushlab turish uchun laganda tayyorlanadi
Jel quduqlarini yaratish uchun laganda ichiga taroq qo'yiladi
Agaroz gel kukuni tampon eritmasi bilan aralashtiriladi. Bu eritmaguncha isitiladi, keyin salqinlash uchun laganda ichiga quyiladi. Tampon - bu DNKni barqaror shaklda tashish uchun ishlatiladigan suyuqlik
Jel tepsisi elektroforez kamerasiga joylashtiriladi, keyin jelni yopish uchun bufer bilan to'ldiriladi. Bu har ikki uchidagi elektrodlarning elektr tokini u orqali o'tishiga imkon beradi
DNK namunalari DNK ko'rinadigan bo'lishi uchun yuklovchi bo'yoq bilan aralashtiriladi. Bu quduq tubiga cho'kib ketishi uchun DNKni og'ir qilish uchun glitserin yoki saxaroza o'z ichiga oladi
Jelning ustiga xavfsizlik qopqog'i qo'yilgan, elektrodlar quvvat manbaiga ulangan va yoqilgan
Bo'yoq markeri jel bo'ylab harakatlangach, oqim o'chadi va laganda laganda chiqariladi
DNK molekulalari jelni metilen ko'k yoki etidiy bromid bilan bo'yash orqali ko'rinib turadi, u DNK bilan bog'lanadi va UV nurida floreslanadi.
Jel matritsasi manfiy zaryadlangan DNK molekulalari musbat terminalga qarab harakatlanayotganda elak vazifasini bajaradi
Katta molekulalar teshiklardan o'tishda qiynaladi
Kichik molekulalar osongina harakatlanadi
DNKni profillashda ishlatiladigan DNKning gel elektroforezi
Xromosomalarda oddiy, takrorlanmagan kodlangan DNK ketma-ketligi mavjud bo'lib, ular genom bo'ylab tarqalgan. Qisqa ketma -ketliklar mikrosatellitlar yoki qisqa tandemli takrorlanishlar deb ataladi.
Jel elektroforez DNK profilining bir turi bo'lib, bir odamni boshqasidan farqlash uchun ishlatiladi.
Bu usul jinoyatlarni tergov qilish, ota -ona masalalari, chorvachilik nasllari va kasalliklarni aniqlashda qo'llaniladi.
Tu Jarayon
DNK chiqariladi
Mikroto'lqinlar PCR yordamida kuchaytiriladi
Mikrosatellitlar uchun maxsus primerlar ishlatiladi
Jel elektroforezida ajratilgan bo'laklar
DNK profilining otalikni aniqlash va shuningdek, sud -tergov ta'siriga ta'sirini tasvirlab bering.
Otalikni tekshirish
DNK namunalari ona, bola va potentsial otalardan olinadi. Boladagi barcha DNK bo'laklari onasi yoki otasi bilan mos kelishi kerak. Boladagi guruhlar onada yoki otada uchraydi (1 -erkak)
Sud -tergov
DNK jabrlanuvchidan, jinoyat joyidan va gumonlanuvchilardan olinadi. Guruhlar gumonlanuvchilar bilan bog'lanishadi, ammo qurbonlarning DNKini yo'q qilish uchun. Masalan, 1 -gumonlanuvchi namunaga mos keladi
DNK profillarini tahlil qilib, otalik yoki sud -tergov ishlari to'g'risida xulosa chiqaring
3.4.6 – To'liq inson genomining ketma -ketligining uchta natijasini belgilang
Inson genomlari loyihasi insoniyatning barcha genlarini aniqlash va xaritasini tuzish bo'yicha xalqaro tadqiqot bo'ldi. Loyihaning yakunlanishidan biz katta foyda ko'rdik, jumladan:
Inson genlari sonini bilish
Maxsus genlarning joylashishi. Inson genomida 30 mingga yaqin gen bor, ularning hammasi aniqlangan.
Barcha ma'lumotlar kelajakda ma'lumot olish va tadqiq qilish uchun ma'lumotlar bazasida saqlangan.
Proteinlar va ularning o'ziga xos funktsiyalarini kashf etishga ruxsat berilgan.
Ushbu tadqiqot uchun ishlab chiqilgan texnologiyalar boshqa sohalarda ham qo'llaniladi.
Organizmlar o'rtasidagi evolyutsion munosabatlarni genetika yordamida aniqlash mumkin.
Biroq, loyihadan kelib chiqadigan axloqiy, huquqiy va ijtimoiy muammolar mavjud.
Ayting -chi, genlar turlar o'rtasida o'tkazilganda, ulardan tarjima qilingan polipeptidlarning amino kislotalar ketma -ketligi o'zgarmaydi, chunki genetik kod universaldir.
Genetik kod universaldir, barcha ma'lum organizmlar oqsillarni kodlash uchun bir xil nuklein kislotalardan foydalanadilar. Printsipial jihatdan, agar biz genni bir turdan ikkinchisiga o'tkazsak, uni transkripsiya qilish va o'sha oqsilga tarjima qilish kerak.
Plazmidlar, mezbon hujayra (bakteriya, xamirturush yoki boshqa hujayra), restriktsiya fermentlari (endonukleazalar) va DNK ligazasini o'z ichiga olgan genlarni uzatish uchun ishlatiladigan asosiy texnikani belgilang.
Prokaryotik organizmlarda DNKning ko'p qismi bitta dumaloq xromosomada bo'ladi. Ularda ham bor plazmidlar- bu sitoplazmada erkin suzuvchi DNKning kichikroq doiralari. Plazmidlarni maqsadli ketma -ketlikdagi fermentlar yordamida olib tashlash va ajratish mumkin.
Boshqa organizmdan olingan DNK bo'laklari ham xuddi shu restriktsiya fermenti yordamida bo'linishi mumkin. Bo'laklarni ochiq plazmidga qo'shish va ularni ligaza bilan birlashtirish mumkin. Rekombinant plazmidlarni yangi xost hujayralarga kiritish va keyin klonlash mumkin.
Do'stlaringiz bilan baham: |
