Филогенетические деревья

Download 3,11 Mb.

1 2 3 4 5 6

Bog'liq
Такдимот 7 мавзу

“АМАЛИЙ МОЛЕКУЛЯР ЗООЛОГИЯ” Маърузачи: б.ф.д., проф. Абдурахим Эргашевич КУЧБОЕВ

МАВЗУ-Полимераза занжирли реакция (ПЗР) услубининг асосий тушунчаси. ПЗР-амплификация

Полимераза занжирли рекция (ПЗР) услубини асосий тушунчаси. ПЗР учун керакли ядро ва митохондриал маркёрларини танлаш. ПЗР-амплификация ўтқазиш. ПЗР режими.

Полимераза занжир реакцияси (ПЗР) - in vitro амплификация методи бўлиб, унинг ёрдамида қисқа вақт мобайнида муайян сондаги ДНК кетма-кетлигини одатдагидан 1000 маротаба кўпроқ танлаш ёки кўпайтириш мумкин. Метод моҳияти – пробиркада муайян ДНК қисмларини қайталанувчи температура циклларида кўп маротабали кўчириш (амплификация). Амплификациянинг ҳар бир циклида юқорида синтезланган фрагментлар яна ДНК-полимераза ферменти ёрдамида кўчирилади ва ДНК фрагментлари ўзига хос кўп маротаба катталашади.
ПЗР қўлланилиш соҳаси: геном кетма-кетлигини юқори даражали клонлаш, митохондрия ва геном ДНК ларини тўғри секвенирлаш, нуклеотид кетма-кетлиги ўзгарувчанлигини таҳлилаш ва касаллик қўзғатувчиларни аниқлаш.

ПЗРсини ўтказиш учун реакцион аралашмада (Master Mix) турли хил таркиблар бўлиши зарур:
1. Иккита праймер (f,r) – суъний йўл билан синтезланган.
Праймернинг нуклеотидлар кетма-кетлигига бўлган талаблар:
Ички иккиламчи тузилишнинг бўлмаслиги;
Нуклеотидлар таркибининг мувозанатланган бўлиши Г/Ц, A/T ва ҳамма кетма-кетлик бўйича тўғри тақсимланганлиги;
Димер праймерлар бўлмаслиги учун, 3'чи охири орасида комплементарликни бўлмаслиги.
Праймерларнинг оптимал концентрацияси 0.1-0.5 мкМ. Праймерларнинг юқори концетрацияси ўзига хос бўлмаган қиздиришга ёки ўзиги хос бўлмаган ПЗР-амплификация маҳсулотлари йиғилишига олиб келиши мумкин.

Download 3,11 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:

1 2 3 4 5 6