Филогенетические деревья

ПЗР Циклик температура режими - Ҳар бир амплификация цикли 3та босқичдан иборат:

• ПЗР Циклик температура режими - Ҳар бир амплификация цикли 3та босқичдан иборат:
• Денатурация. Реакцион аралашмани 95°С гача қиздирилади, бунинг натижасида икки занжирли ДНК молекуласи ечилиб кетади (ажралиб) ва иккита бир занжирли молекула ҳосил қилади.
• Юмшатиш (праймерларнинг қўшилиши, гибридланиши). Праймерлар бир занжирли ДНКга қўшилади. Кўзланган специфик соҳа чегарасидаги қарама-қарши ДНК занжирларига мос келадиган кетма-кетликка тўғри ва қарама- қарши праймерлар комплементар бўлиб қўшилади. Ҳар бир жуфт праймер учун ўзининг юмшатиш температураси мавжуд бўлиб, у 50-65°С оралиқда бўлади. Юмшатиш вақти 20-60 сек.
• 3 Элонгация (ДНК синтези). ДНК занжирининг қарама-қарши йўналишда 5’чи охирдан 3’чи охирга комплементар қуриб битирилиши. ДНКнинг янги занжирлари синтези учун 2'- дезоксинуклеозид-5'-трифосфат эритмаси материал бўлиб хизмат қилади. Бу босқичда реакцион аралашмадаги температурани оптимум даражасига олиб чиқилади (72° С). Элогация давом этиш вақти апмлификация қилинаётган ДНК фрагментининг учунлиги ёки ДНК-полимераза ферментининг ишлаш тезлиги билан белгиланади.

Апмлификациянинг температура цикли кўп маротаба қайтарилади (25,30 ва ундан кўп). Ҳар бир циклда синтезланаётган ДНК фрагментлари икки маротаба кўпаяди. Циклик жараён натижаси ДНК фрагментларининг ўзига хос кўпайишидир.

• Апмлификациянинг температура цикли кўп маротаба қайтарилади (25,30 ва ундан кўп). Ҳар бир циклда синтезланаётган ДНК фрагментлари икки маротаба кўпаяди. Циклик жараён натижаси ДНК фрагментларининг ўзига хос кўпайишидир.
• Тугалланаётган қурилиш. Одатда ПЗР- амплификацияси охирги циклидан сўнг қисман синтезланган ПЗР маҳсулотларини тугаллаш учун реакцион аралашмани қўшимча равишда 5-15 дақиқа мобайнида 72°С да инкубация қилинади.
• ”Иссиқ старт” ("hot-start") – ПЗР амплификацияси реакциясидаги носпецифик маҳсулотларни ҳосил бўлишини олдини олиш учун ёндашув ҳисобланади. Унинг моҳияти шундан иборатки, пробиркада праймерларни специфик юмшатиш учун керакли шароит бўлмагунга қадар реакцияни бошланмаслиги.