Филогенетические деревья

ПЗР-амплификацияси

• Ўрганилаётган ДНК соҳалари картаси

• Ядро генлари рДНК ички транскрип спейсери (ITS1 и ITS2) маркерлари ёрдамида ПЗР ўтқазиш

• *Кўрсатгич билан келтирилган праймерларининг амплификациядаги йўналиши
• келтирилган;
• 18S – кичик субъбирликдаги рибосома РНК;
• 28S – катта субъбирликдаги рибосома РНК;
• ITS – ички транскрип спейсер

ПЗР-амплификациясини ўтказиш

• Ишни бошлашдан аввал реациянинг ДНК- полимеразадан ташқари хамма компонентларини эритиб олинг ва бир қанча вақтга музга жойлаштириб туринг. 0,2 мл пробиркани музга жойлаштиринг.

• ПЗР учун мўлжалланган Master/Mix таркиби

Реакция компонентлари	Хажм, мкл
PCR buffer-10Х Taq-буфер+2,5 мМ MgCl2	4
dNTPs - дНТФ (0,2 мкМ 2'-дезоксинуклеозид-5'- трифосфат)	0,4
Primer F - 20 мкМ тўғри праймер *	0,5
Primer R - 20 мкМ тескари праймер *	0,5
Taq-полимераза 5 ед/мкл	0,2
dH20- Дистиллирланган сув H20	12,4
DNA- ДНК матрицаси	2
Реакциянинг якуний хажми	20

Праймер номланиши	Нуклеотид кетма-кетлиги 5’→3’
Тўғри праймери 18Sd71 (F)	GTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCG
Тескари праймери 28Sr1 (R)	ATATGCTTAARTTCAGCGGGT

• ITS1-5,8S –ITS2 рРНК генларини фрагменти амплификацияси учун спецефик праймерлар