Amaliy matematika” fakulteti, “biotexnologiya” kafedrasi, 5320500-“Biotexnologiya”(tarmoqlar bo`yicha) yo‘nalishi 151-20- guruh 2-bosqich talabasi Oxunboyev Ziyodjon Muzaffar o`g`lining

R. carthamoides o'zgartirilgan ildiz ekstraktining inson glioma hujayralariga nisbatan sitotoksikligi bo'yicha oldingi tadqiqotlarimizga asoslanib, ushbu tadqiqotning maqsadi inson leykemiyasining ikkita hujayra liniyasida sitotoksik va genotoksik faolligini baholashdir: miyeloid (K-562) va limfoid ( Hujayra hayotiyligini, mitoxondriyal DNK (mtDNK) va yadroviy DNK (nDNK) shikastlanishlarini, mitoxondriyal membrana potentsialini yo'qotishni va mtDNK nusxasi raqamini o'zgartirishni baholash orqali CCRF-CEM) va o'pka saratoni hujayra liniyasidagi apaptozni kamaytiradi.
2.3. Maxsarsimon lavzeya (Rhaponticum carthamoides) dorivorlik xususiyati. R. carthamoides ning o'zgartirilgan ildizlari ilgari A4 Agrobacterium rhizogenes transformatsiyasi bilan olingan. O'zgartirilgan ildizlarning paydo bo'lishi va o'si shi, shuningdek, o'zgartirilgan ildizlar ekstraktining fitokimyoviy tahlili (kofeoilkin kislotasi hosilalarini aniqlash va miqdorini aniqlash) avvalgi tadqiqotimizda tasvirlangan edi. Taqqoslangan material sifatida tuproqda o'sadigan o'simliklarning ildizlari ishlatilgan.
Inson saraton hujayralari tavsifi. Quyidagi hujayra qatorlari ishlatilgan: inson o'pkasi adenokarsinomasi A549 (CCL-185, ATCC) va ikkita inson leykemiya liniyasi - T limfoblast CCRF-CEM hujayralari (CCL-119, ATCC) va surunkali miyelogen leykemiya K-562 (CCL-243, ATCC)). Hujayra liniyalari American Type Culture Collection (ATCC™, Manassas, VA, AQSh) dan olingan. A549 xujayralari DMEM muhitida, CCRF-CEM va K-562 hujayralarida RMPI 1640 muhitida, 1 ml madaniy muhit uchun 100 birlik kaliy penitsillin va 100 mkg streptomitsin sulfat va 10% ( v/v ) bilan to'ldirilgan holda yetishtirildi. issiqlik bilan inaktivatsiyalangan homila sigir zardobi (FBS). Barcha hujayra liniyalari 37 ° C va 5% CO 2 da namlangan inkubatorda o'stirildi. Hujayra madaniyati reagentlari Lonza shahrida (Bazel, Shveytsariya) sotib olingan.
. Hujayra hayotiyligi (MTT tahlili)
MTT tahlili Rc TR ekstrakti yoki Rc NR ekstrakti (0,019-5,0 mg/mL) bilan 24 soatlik davolashdan so'ng hujayra hayotiyligini aniqlash uchun ishlatilgan. Qisqacha aytganda, A549 xujayralari (1 × 10 4 hujayra / quduq), CCRF-CEM hujayralari (1 × 10 5 hujayra / quduq) va K-562 (1 × 10 5 hujayra / quduq) 96 quduqli plastinkaga ekilgan. va 37°C va 5% CO 2 da inkubatorda bir kechada yetishtiriladi. Keyin vosita olib tashlandi va Rc TR ekstrakti yoki Rc NR ekstrakti bilan to'ldirilgan yangi muhit bilan almashtirildi. Hujayralar 24 soat davomida inkubatsiya qilindi, bir marta yuvildi va santrifüj qilindi (300 × gbesh daqiqa davomida 22 ° C da) va 0,5 mg / ml 3-(4,5-dimetiltiyazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium bromid (MTT) bilan 37 ° C da inkubatsiya qilinadi. To'rt soatdan keyin MTT eritmasi ehtiyotkorlik bilan tashlandi va formazan kristallari DMSOda eritildi. Nihoyat, BioTek Synergy HT Microplate Reader (BioTek Instruments, Winooski, VT, AQSh) yordamida 630 nm fonni olib tashlash bilan 570 nm to'lqin uzunligida har bir quduq uchun absorbans o'lchandi. Nisbiy hujayra hayotiyligi 100% deb belgilangan ishlov berilmagan (nazorat) hujayralarga nisbatan foiz sifatida ifodalangan. Barcha tajribalar uch nusxada amalga oshirildi.
Mitoxondriyal membrana potentsiali Flyuoresan, bo'yoq JC-1 (5',6,6'-tetraxloro-1,1',3,3'-tetraetilbenzimidazolilkarbosiyanin yodid) mitoxondriyal membrana salohiyatini baholash uchun ishlatilgan. Hujayralar 50 mkda 1 × 10 4 hujayra / quduq (A549) va 1 × 10 5 hujayra / quduq (CCRF-CEM va K-562) zichligida shaffof tubi (Greiner) bo'lgan 96 teshikli qora plitalarga ekilgan. L madaniyat muhiti va bir kechada yopishtirishga ruxsat beriladi. Keyinchalik, hujayralar Rc TR ekstrakti, Rc NR ekstrakti (IC 50 konsentratsiyasi) yoki Rc ekstraktisiz (nazorat hujayralari) bilan 24 soat davomida inkubatsiya qilindi . Keyin hujayralar CO 2 da 37 ° C da HBSS da 5 m M JC-1 bilan 30 daqiqa davomida oldindan inkubatsiya qilindi.(5%) inkubator. Nihoyat, hujayralar santrifüj qilindi (22 ° C da 10 daqiqa davomida 300 × g) va ikki marta HBSS bilan yuviladi. Floressensiya BioTek Synergy HT Microplate Reader qurilmasida (BioTek Instruments, Winooski, VT, AQSh) 530 nm/590 nm va 485 nm/538 nm filtr juftlari bilan o'lchandi. Natijalar 530 nm/590 nm da o‘lchangan floresansning 485 nm/538 nm (agregatlarning monomer floresansiga) nisbati sifatida ko‘rsatilgan. Tajribalar har bir hujayra chizig'i uchun uch marta takrorlandi. Hujayra namunalari Rc TR ekstrakti, Rc NR ekstrakti (IC 50 konsentratsiyasi) yoki Rc ekstraktisiz (nazorat hujayralari) bilan 24 soat davomida inkubatsiya qilindi. Jami genomik DNK (yadro yoki mitoxondrial) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq QIAamp DNK Mini Kit (Qiagen, Valensiya, CA, AQSh) tomonidan 2 × 10 6 hujayradan ajratilgan. DNK kontsentratsiyasi 260 nm da absorbansning spektrofotometrik o'lchovi bilan aniqlandi va tozalik BioTek Synergy HT Microplate Reader (BioTek Instruments, Winooski, VT, AQSh) yordamida A260/A280 nisbati bo'yicha hisoblab chiqilgan. Tozalangan DNK keyingi tahlilga qadar -20 ° C da saqlanadi.
mtDNK va nDNK zararlarini aniqlash - yarim uzoq muddatli qRT-PCR (SLR-qRT-PCR) Yarim uzoq muddatli miqdoriy RT-PCR (SLR-qRT-PCR) mitoxondriyal DNK (mtDNK) va yadroviy DNK (nDNK) zararini aniqlash uchun ishlatilgan [ 9 ]. Tekshirilayotgan hududlarda mitoxondriyal DNK (mtDNK) va yadroviy DNK (nDNK) shikastlanish darajasini aniqlash uchun bir xil mitoxondrial yoki yadro genomik mintaqasida joylashgan uzun va kichik DNK fragmentlari ishlatilgan: ND1 (mitoxondriyal kodlangan NADH: ubiquinone oksidoreduktaza yadrosi subunit), ND5 (mitoxondriyal kodlangan NADH: ubiquinone oksidoreduktaza yadro subunit 5), TP53 (o'simta oqsili p53) va HPRT1 (gipoksantin fosforiboziltransferaza 1). Primer ketma-ketliklari, SLR-qRT-PCR kuchaytirilishi va zararni hisoblash Bijak va boshqalarga muvofiq amalga oshirildi. [ 10]. SLR-qRT-PCR kuchaytirilishi CFX96™ real vaqt tizimida (Bio-Rad) amalga oshirildi. Barcha tajribalar uch nusxada amalga oshirildi.
Mitoxondriyal DNK nusxasi raqami
Standart sifatida yadroviy DNK (nDNK) tarkibidan foydalangan holda inson mitoxondrial DNK (mtDNK) nusxalarining nisbiy sonini baholash uchun real vaqt rejimida miqdoriy PCR (qRT-PCR) ishlatilgan. Ikki gen, ND1 va ND5, mitoxondriyal maqsad sifatida va SLCO2B1 va SERPINA1 genlari yadroviy maqsad sifatida tanlangan. Primer ketma-ketliklari, qRT-PCR kuchaytirilishi va mtDNK nusxasi sonini hisoblash Bijak va boshqalar tomonidan tasvirlangan tadqiqotga muvofiq amalga oshirildi. Ma'lumotlar CFX-96 aniqlash tizimi (Bio-Rad, Hercules, CA, AQSh) yordamida to'plangan. Har bir reaksiya uch nusxada amalga oshirildi va salbiy nazorat (shablon DNKsiz) ham har bir ishga kiritilgan.
Statistik tahli. Natijalar o'rtacha ± SD sifatida hisoblanadi. Ma'lumotlarning normalligi Shapiro-Wilk testi bilan aniqlangan va dispersiya tengligini baholash uchun Leven testidan foydalanilgan. Namunalar (STATISTICA 12.0 dasturiy ta'minoti, StatSoft, Polsha) o'rtasidagi sezilarli farqlarni ( p <0,05) aniqlash uchun Kruskal-Wallis testi va Tukeyning post hoc testi bilan bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) ishlatilgan .
III-BOB. RHAPONTICUM CARTHAMOIDES O’SIMLIGINING ILDIZ EKSTRAKTI USTIDA O’TKAZILGAN TAJRIBLALAR
3.1 Rhaponticum carthamoides tukli ildizlaridan ajratilgan genomik DNKning PCR tahlili.
Ildizi ekstraktida o’tkazilgan amaliyotlar natijasi. Rc ekstraktining ikkita inson leykemiya hujayra chizig'iga (K-562 va CCRF-CEM) va o'pka saratoni hujayra liniyasiga (A549) qarshi sitotoksik faolligi aniqlandi.
Ushbu tadqiqotda uchta inson saraton hujayralari liniyasi ishlatilgan: K-562 surunkali miyelogen leykemiya, CCRF-CEM leykemik limfoblastlar va A549 o'pka adenokarsinomasi. Hujayralar 24 soat davomida R. carthamoides ( Rc TR ekstrakti) ning o'zgartirilgan ildizlaridan olingan ekstraktning turli konsentratsiyasi (0,019-5 mg / ml) bilan ishlov berildi. Taqqoslash uchun tuproqda o'sadigan o'simliklarning ildizidan olingan ekstrakt ( Rc NT ekstrakti) ishlatilgan. Ikkala Rc ekstrakti ham barcha tekshirilgan hujayra liniyalarining hujayra hayotiyligini konsentratsiyaga bog'liq holda inhibe qilgani aniqlandi (1-rasm), lekin Rc TR ekstrakti kuchliroq xususiyatlarga ega edi. Bundan tashqari, ikkita leykemiya hujayra liniyasi (CCRF-CEM va K-562) A549 o'pka adenokarsinomasidan ko'ra Rc TR ekstraktiga sezgirroq edi . Rc TR ekstrakti sinovdan o'tgan ikkala leykemiya hujayra liniyasi (K-562 va CCRF-CEM) uchun ham xuddi shunday sitotoksik faollikka ega edi. Ushbu hujayra liniyalari uchun 0,313 mg / ml konsentratsiyada Rc TR ekstrakti bilan davolashdan so'ng hujayra hayotiyligining 50% ga erishildi (1-rasm). A549 inson o'pka saratoni hujayralari uchun bu ta'sirni olish uchun Rc TR ekstraktining ikki baravar konsentratsiyasi kerak edi.

Tuproqda o'stirilgan o'simliklar ildizlaridan ( Rc NR ekstrakti) va o'zgartirilgan ildizlardan ( Rc TR ekstrakti) R. carthamoides ekstraktlari bilan 24 soat davolashdan so'ng K-562, CCRF-CEM va A549 hujayra liniyalarining hayotiyligi . Natijalar uchta mustaqil tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. ∗ p < 0,05 Rc NR ekstrakti va Rc TR ekstrakti.

1-rasm
Tuproqda o'stirilgan o'simliklar ildizlaridan (Rc NR ekstrakti) va o'zgartirilgan ildizlardan (Rc TR ekstrakti) R. carthamoides ekstraktlari bilan 24 soat davolashdan so'ng K-562, CCRF-CEM va A549 hujayra liniyalarining hayotiyligi. Natijalar uchta mustaqil tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. ∗ p < 0,05 Rc NR ekstrakti va Rc TR ekstrakti.
. Rc ekstraktining inson leykemiya hujayralari liniyalarida (CCRF-CEM va K-562) va o'pka saratoni hujayralari liniyasida (A549) mitoxondrial membrana potentsialiga ta'siri.
Ushbu tadqiqot, shuningdek, R. carthamoides ildiz ekstrakti (TR va NR ekstraktlari) bilan davolash qilingan ikkita leykemiya hujayra liniyasi va o'pka saratoni hujayra liniyasida mitoxondriyal membrana potentsialining o'tkazuvchanligini baholadi. Ushbu o'simlik ekstraktlari nazorat hujayralariga nisbatan barcha sinovdan o'tgan hujayra liniyalarida mitoxondriyal membrana potentsialini kamaytirgani kuzatildi (2-rasm), Rc TR ekstrakti esa kuchliroq xususiyatlarga ega edi. Rc TR ekstrakti mitoxondriyal membrana potentsialini K-562 hujayralarida taxminan 2,4 barobar va CCRF-CEM va A549 hujayralarida 1,2 barobar kamaytirdi.

2-rasm
K-562, CCRF-CEM va A549 hujayra liniyalaridagi mitoxondriyal membrana potentsiali R. carthamoides ekstrakti bilan 24 soat davolashdan so'ng, tuproqda o'stirilgan o'simliklarning ildizlaridan (Rc NR ekstrakti) va o'zgartirilgan ildizlardan (Rc TR ekstrakti). Mitoxondriyal membrana potentsialini o'lchash uchun floresan bo'yoq JC-1 ishlatilgan. Mitoxondriyal membrana potentsiali 530 nm/590 nm dan 485 nm/538 nm (agregatlar va monomer) floresansi nisbati sifatida ifodalanadi. Natijalar uchta mustaqil tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. Nazorat: ishlov berilmagan hujayralar. ∗ p <0,05 hujayralarni Rc NR ekstrakti yoki TR ekstrakti bilan nazorat qilish hujayralari bilan davolash; # p < 0,05 Rc NR ekstrakti Rcga nisbatanTR ekstrakti.
. Rc ekstraktlari bilan davolashdan so'ng, inson leykemiya hujayralarining (CCRF-CEM va K-562) va o'pka saratoni hujayralarining (A549) mitoxondrial DNK (mtDNK) va yadroviy DNK (nDNK) zararlarini miqdoriy aniqlash
Tadqiqot, shuningdek, SLR-qRT-PCR orqali R. carthamoides ildizi ekstraktlari bilan 24 soatlik davolashdan so'ng, inson saraton hujayralarining uchta liniyasida mtDNK va nDNK zararlarini o'rganib chiqdi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, Rc TR va NR ekstraktlari barcha saraton hujayralarining ND1 hududlarida va ND5 hududlarida faqat inson leykemiya hujayralarining (K-562 va CCRF-CEM) mtDNK shikastlanish darajasini oshirish orqali genotoksik faollikka ega . Rc NR ekstrakti va Rc TR ekstrakti bilan davolashdan keyin ND1 hududida lezyon darajasi nazorat hujayralariga (ildiz ekstrakti bilan ishlov berilmagan hujayralar) nisbatan oshdi: 10 kb DNK uchun 3,6 (Rc NR ekstrakti) va 10 kb DNK uchun 4,7 jarohatlar (Rc TR ekstrakti) K-562 hujayralarida. Bundan tashqari, Rc TR ekstrakti Rc NR ekstrakti bilan solishtirganda CCRF-CEM hujayralarida ND1 hududida yuqori lezyon tezligini keltirib chiqardi (3-rasm) natijada 10 kb DNK uchun 4,1 ta jarohatlar va 10 kb DNK uchun 2,8 ta jarohatlar, o‘z navbatida A549 hujayralari uchun, Rc NR ekstrakti bilan ishlov berilganlarda 10 kb DNK uchun 5 ta jarohatlar va Rc TR ekstraktidan so‘ng (siz) 10 kb DNK uchun 5,5 ta jarohatlar paydo bo‘ladi . sezilarli farqlar). Bundan tashqari, ND5 hududida mtDNK shikastlanishining yuqori darajasi faqat inson leykemiya hujayralarida aniqlandi: K-562 hujayralarida 10 kb DNK uchun 2,9 ta jarohat ( Rc NR ekstrakti) va 10 kb DNK uchun 4,0 ( Rc TR ekstrakti) va CCRF-CEM hujayralarida 10 kb DNK ( Rc NR ekstrakti) uchun 4,3 ta jarohat va 10 kb DNK ( Rc TR ekstrakti) uchun 4,6 ta jarohat (3-rasm). CCRF-CEM hujayralari uchun sinovdan o'tgan ildiz ekstraktlari o'rtasida sezilarli farqlar topilmadi.


3-rasm
mtDNK zarari tuproqda oʻstirilgan oʻsimliklar ildizlaridan R. carthamoides ekstraktlari (Rc NR ekstrakti) bilan 24 soat davolashdan soʻng K-562, CCRF-CEM va A549 hujayra liniyalarida ND1 va ND5 genlarida 10 kb ga zararlanish chastotasi sifatida baholanadi va o'zgartirilgan ildizlar (Rc TR ekstrakti). SLR-qRT-PCR mtDNK zararini aniqlash uchun ishlatilgan. Natijalar uchta mustaqil tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. Nazorat: ishlov berilmagan hujayralar. ∗ p <0,05 hujayralarni Rc NR ekstrakti yoki TR ekstrakti bilan nazorat qilish hujayralari bilan davolash; # p <0,05 Rc NR ekstrakti va Rc TR ekstrakti.
ldiz ekstraktlari, shuningdek, inson leykemiya hujayralarida (K-562 va CCRF-CEM) TP53 mintaqasida nDNK shikastlanishini oshirish orqali genotoksik faollikni ko'rsatdi, ammo sinovdan o'tgan ekstraktlar o'rtasida sezilarli farqlar topilmadi (4-rasm). Natijalar shuni ko'rsatdiki, K-562 hujayralarida o'simlik ekstraktlari nDNKning shikastlanishini 10 kb uchun taxminan 3,5 lezyonga, CCRF-CEM hujayralarida esa 10 kb uchun taxminan 4,5 lezyonga oshirdi. Bundan tashqari, Rc NR ham, TR ham sinovdan o'tgan hujayralar qatoridadir.


4-rasm
nDNK shikastlanishi TP53 va HPRT1 genlarida K-562, CCRF-CEM va A549 hujayra liniyalaridagi 10 kb uchun lezyon chastotasi sifatida baholanadi, tuproqda o'stirilgan o'simliklar ildizlaridan R. carthamoides ekstraktlari ( Rc NR ekstrakti) va 24 soat davolashdan keyin. o'zgartirilgan ildizlar ( Rc TR ekstrakti). SLR-qRT-PCR nDNK zararini aniqlash uchun ishlatilgan. Natijalar uchta mustaqil tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. Nazorat: ishlov berilmagan hujayralar. ∗ p <0,05 hujayralarni Rc NR ekstrakti yoki TR ekstrakti bilan nazorat qilish hujayralari bilan davolash; # p <0,05 Rc NR ekstrakti va Rc TR ekstrakti.
3.4. Rc ekstrakti bilan davolashdan so'ng, inson leykemiya hujayralari qatorlarida (CCRF-CEM va K-562) va o'pka saratoni hujayra liniyasida (A549) mtDNK nusxasi raqamini aniqlash
MtDNK nusxasi soni uchta inson saraton hujayralari qatorida ham aniqlandi: K-562, CCRF-CEM va A549. Rc TR va NR ekstraktlari bilan davolashdan so'ng mtDNK nusxasi soni barcha sinovdan o'tgan saraton hujayralari qatorlarida bir oz ko'tarilgan, ammo nazorat hujayralari bilan sezilarli farqlarsiz (5-rasm).

5-rasm
Tuproqda yetishtirilgan oʻsimliklar (Rc NR ekstrakti) va oʻzgartirilgan ildizlarning (Rc TR ekstrakti) ildizlaridan R. carthamoides ekstraktining 24 soatlik inkubatsiyadan soʻng K-562, CCRF-CEM va A549 hujayra liniyalaridagi mtDNK nusxasi soniga taʼsiri. . mtDNK nusxasi raqamini baholash uchun qRT-PCR ishlatilgan. Natijalar uchta mustaqil tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. Nazorat: ishlov berilmagan hujayralar
Dunyo bo'ylab o'limning uchinchi sababi bo'lgan saraton, ko'pincha onkogenlar yoki o'simtani bostiruvchi genlar mutatsiyalari bilan qo'zg'atiladigan signal yo'llaridagi o'zgarishlar bilan bog'liq .
So'nggi yillardagi tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatdiki, R. carthamoides ning o'zgartirilgan ildiz ekstrakti inson glioma hujayralariga qarshi sitotoksik faollikka ega va mitoxondriyal membrana potentsialini buzish va ROS darajasini oshirish, Bax/Bcl-2 darajasini o'zgartirish yoki apoptozni keltirib chiqarishi mumkin. p53, kaspaza-3 yoki kaspaza-9 ni faollashtirish orqali. Ushbu o'simlik ekstrakti, shuningdek, DNKning shikastlanishini qo'zg'atish, parchalangan PARP1-musbat hujayralar sonini ko'paytirish va g -H2A.X-musbat hujayralar darajasini o'zgartirish orqali inson glioma hujayralariga genotoksik ta'sir ko'rsatdi: DNKdagi qo'sh zanjir uzilishlari belgisi. R. carthamoides ning tabiiy o'sadigan o'simliklarning ildizlari haqida xabar berdiMCF-7 inson ko'krak saratoni hujayralarining hayotiyligini bostirdi. Shuni ta'kidlash kerakki, Rc TR ekstrakti 0,1-1,5 mg / ml konsentratsiya oralig'ida oddiy inson astrositlariga qarshi sitotoksiklikni ko'rsatmagan.
Rc TR ekstraktida mavjud bo'lgan kofeoilkin kislotasi hosilalari apoptozni induktsiya qilish orqali, ichki yo'l va kaspaza faollashuvi orqali inson glioma hujayralarining hayotiyligini inhibe qilishi mumkin. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, inson ratsionida keng tarqalgan ushbu fenolik birikmalar saraton hujayralarining turli turlarida saratonga qarshi faollikka ega. Ekbatan va boshqalar. turli xil polifenol birikmalari p53 kabi hujayra sikli regulyatorlarini modulyatsiya qilish yoki NF- k B, aktivator protein 1 yoki mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz atrofidagi molekulyar yo'llarni inhibe qilish orqali harakat qiladigan antiproliferativ mexanizmlarni namoyish qilishi mumkinligini ko'rsatadi.

6-rasm
RcUshbu tadqiqotda TR ekstrakti kofeoilkin kislotasi hosilalariga boy bo'lib, taxminiy aniqlangan trikafeoilkinik kislota hosilasi (5,97 mg / g DW), xlorogen kislota (5,12 mg / g DW) va 3,5- O -dikaffeoilkin kislotasi (3,08 mg) mavjud edi. /g DW) asosiy birikmalar.
Ildiz hosil qiluvchi eksplantlar soni, ammo bu ta'sir P = 0,05 da statistik ahamiyatga ega bo'lmagan (1-jadval). AcS bilan va AcSsiz davolash usullari o'rtasida ildiz shakllanishidagi nisbatan past farqlar, bu birikma R. carthamoides transformatsiyasining asosiy omili emasligini ko'rsatadi, bu barg eksplantlarida mavjud bo'lgan fenolik birikmalarning yuqori darajasi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. 3.2. Turli suyuq muhitda tukli ildizlarning o'sishi. To'liq quvvatli muhitda o'stirilgan tukli ildizlar (RC3 liniyasi) yarim kuchli muhitda o'stirilgan ildizlarga qaraganda ko'proq biomassaga ega edi (2(a) va 2(b)-rasm). Bu B5 muhitida o'stirilgan Levisticum officinale tukli ildiz madaniyatiga o'xshardi, bu 1/2 B5 muhitida (200 g L) o'stirilgan ildizlarga qaraganda biomassaning (350 g L -1 FW va 10 g L -1 DW) ko'proq o'sishini ko'rsatdi. -1 FW va 7 g L -1 DW. Ushbu tadqiqotda, tukli ildiz biomassasining eng yuqori to'planishi ozuqa moddalarining to'liq konsentratsiyasi bilan WPM muhitida erishildi. 35 kundan so'ng, tukli ildizlarning yangi vazni fotoperiodda o'stirilgan 93 g L -1 va qorong'ida o'stirilgan ildizlar uchun 82,8 g L -1 ni tashkil etdi (2-rasm (a)). Quruq og'irliklar uchun qiymatlar mos ravishda 12,0 g L -1 va 7,5 g L -1 edi (2-rasm (b)). Ildizlar o'rtacha diametri 0,5 mm bo'lgan ingichka bo'lib, uzun va ko'p novdalarga ega edi (1-rasm (b)). WPM muhiti Trigonella foenum-graecum [15] yoki Dracocephalum moldavica [16] kabi boshqa oʻsimlik turlarining oʻzgartirilgan ildizlarini oʻsishi uchun ham eng yaxshi vosita edi. Tekshirilgan muhitlardan yarim quvvatli so'l va mikrotuz konsentratsiyasiga ega SH, B5 va WPM yangi va quruq vazn bo'yicha R. carthamoides ildiz biomassasining eng past darajasini keltirib chiqarishi aniqlandi (2(a) va 2-rasmlar) b)). Makro va mikroelementlarning to'liq va yarim quvvatli tarkibiga ega SH va B5 muhitida saqlanadigan transformatsiyalangan ildizlar o'rtacha ildiz diametri 0,9-1,5 mm bo'lgan qalin va qisqa va kichik shoxlarga ega edi. Odatda, yorug'lik ta'sirida R. carthamoides ning tukli ildizlari o'sishi oshdi, SH va 1/2 SH muhitida o'stirilgan ildizlardan tashqari. Ushbu muhitda fotoperiodda o'stirilgan ildizlarning yangi vazni qorong'uda erishilganidan past edi. Biroq, P = 0.05 da farqlar statistik ahamiyatga ega emas edi. Tukli ildizlar ildiz biomassasining ortishi va ularning morfologiyasi jihatidan barqaror ekanligi aniqlandi. Jismoniy madaniyat sharoitlari R. carthamoides tukli ildizlarining morfologiyasiga ham ta'sir ko'rsatdi; ya'ni fotoperiodda o'stirilgan ildizlar yashil bo'lgan (1(b)-rasm). Bej rangdagi quyuq o'sgan ildizlarda yashil rang yo'q edi. Oldingi hisobot natijalari shuni ko'rsatdiki, tukli ildiz madaniyatining yorug'lik ta'sirida xlorofill biosintezining kuchayishi tufayli yashil rang paydo bo'lishi mumkin 3.3. PCR tahlili. R. carthamoides tukli ildizlarining genetik transformatsiyasi PCR bilan tasdiqlangan. Maxsus PCR primerlari yordamida RC3 tukli ildiz chizig'ida mos ravishda A, rol B, rol C va aux 1 genlariga mos keladigan kutilgan o'lchamdagi 107 bp, 386 bp, 582 bp va 500 bp bo'lgan to'rtta kuchaytirilgan bantlar paydo bo'ldi. Shakl 3, chiziqlar 8, 9, 10 va 13, resp.), lekin salbiy nazorat sifatida ishlatiladigan o'zgartirilmagan surgunlarda emas. Tukli ildizlarning A. rhizogenes bilan ifloslanmaganligini tasdiqlash uchun vir G ga xos primerlar yordamida PCR tahlili o'tkazildi (3-rasm, 12-chiziq). PCR tahlili natijalari R. carthamoides tukli genomiga TL -DNK (A, B, C rolli gen fragmentlari mavjudligi) va TR -DNK (aux 1 gen fragmenti mavjudligi) ham kiritilganligini aniqladi.
XULOSA
Mitoxondriya saraton sezuvchanligi va rivojlanishida asosiy rol o'ynashi mumkinligi sababli, mtDNK o'zgarishlari yoki mtDNK nusxasi sonining o'zgarishi turli saraton bilan chambarchas bog'liq bo'lishi mumkinligini taxmin qilish o'rinli. Gisbergen va boshqalar xabar berganidek va Barrera va boshqalar. glioblastoma, o'pka karsinomasi yoki qizilo'ngach skuamoz hujayrali karsinomani o'z ichiga olgan turli saraton hujayralari qatorlarida mtDNK nusxasi sonidagi o'zgarishlar kuzatilgan; ammo, saraton kasalligida ularning roli hali noma'lum. Ushbu tadqiqotda mtDNK nusxasi soni Rc bilan davolash qilingan barcha sinovdan o'tgan saraton hujayralari qatorlarida biroz ko'tarildi.TR ekstrakti, lekin sezilarli darajada emas. MtDNK nusxasi sonining ko'payishi va kamayishi o'simta hosil bo'lish xavfini oshiradi va saraton hujayralarida kam nusxa ko'chirish soni o'simta rivojlanishi uchun javobgar bo'lishi mumkin yoki kimyoterapiyaga qarshilik mtDNK nusxasi sonining kamayishi, shuningdek, inson osteosarkomasi 143B hujayralarida, yo'g'on ichak saratoni HCT-8 hujayralarida va gepatoma hujayralarida antikanser agentlariga nisbatan yuqori bardoshlik bilan ko'p dori qarshiligi 1 (MDR1) gen ifodasini oshirishi aniqlandi . O'z navbatida, Mei va boshqalar. [ 34] mtDNK nusxasi sonining pastligi saraton hujayralarida ROS darajasining oshishiga olib kelishi va apoptozni qo'zg'atish orqali kemoterapevtik dorilarga sezgirlikni oshirishi mumkinligini ko'rsatadi. Saraton terapiyasiga mumkin bo'lgan yondashuvlardan biri apoptozning induktsiyasi paytida mtDNK tarkibidagi etarli muvozanatni saqlashga asoslangan bo'lishi mumkin . Biroq, Gisbergen va boshqalar saraton hujayralarining mtDNK o'zgarishi noaniq bo'lib qolayotganini va qo'shimcha tadqiqotlar talab qilinishini ko'rsatadigan bir xil turdagi saraton uchun ham ko'tarilgan yoki tushirilgan mtDNK nusxasi soni haqida xabar berdi.
Hozirgi va oldingi topilmalar shuni ko'rsatadiki, R. carthamoides ning o'zgartirilgan ildizlari hujayra hayotiyligini inhibe qilishi va saraton hujayralarining turli turlarida (masalan, glioma hujayralari, leykemiya hujayralari yoki o'pka adenokarsinoma hujayralari) apoptozni keltirib chiqarishi mumkin. Kofeoilkin kislotasi hosilalariga boy bo'lgan bu o'zgartirilgan ildizlar saraton kasalligini davolashda samarali dori bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, Rc TR ekstrakti barcha sinovdan o'tgan inson saraton hujayralari liniyalarida mitoxondriyal membrana potentsialini kamaytirdi va mtDNK va nDNK shikastlanishlarini oshirib, genotoksik faollikka ega. Rc TR ekstrakti mitoxondriyal disfunktsiyani keltirib chiqarish orqali turli saraton hujayralarida kuchli antikanser faolligini ko'rsatadi, ammo ta'sir mexanizmi hali aniq emas va u qo'shimcha tadqiqotlar talab qiladi.

FOYDALANILGAN ADABIYOTLAR.

1. 
   O’SIMLIKLAR SISTEMATIKASI (YUKSAK O’SIMLIKLAR) (X. Xaydarov, Y. Tashpulatov, X. Jalov, I. Mukumov)
   
2. 
   DORIVOR O’SIMLIKLAR YETISHTIRISH TEXNALOGIYASI VA EKOLOGIYASI (O’. Ahmedov, A. Ergashev, A. Abzalov, M. Yo’lchiyeva, D. Mustafaqulov)
   
3. 
   QISHLOQ XO’JALIGI MAHSULOTLARINI SAQLASH VA BIRLAMCHI QAYTA ISHLASH TEXNOLOGIYASI
   
4. 
   4.BIOEKOLOGIYA (O’SIMLIKLAR EKOLOGIYASI) (T. U. Raximova, R. X. Allaberdiyev, N. K. Kuchkarov)
   
5. 
   .(Journal of Medicinal Plants Research 1092-1098, December, 2019 Available online at http://www.academicjournals.org/JMPR ISSN 1996-0875© 2019 Academic Journals)
   
6. 
   Biologik ensiklopediya lug'ati(M. S. Gilyarov tomonidan tahrirlangan). M. 1986. 820 bilan.
   

7. 
   . Jurba O. V., Dmitriev M. ya. dorivor, zaharli va zararli o'simliklar: Ucheb. foyda. M: Colossus, 2005. P. 303.
   

8. 
   O'tish:Saytda Harakatlanish, Qidiruv Yuqori yoki er o'simliklarining sistematikasi. O'tish: saytda harakatlanish, qidiruv 420 bilan.
   
9. 
   . Zamyatina N. G. dorivor o'simliklar. Rossiya tabiatining ensiklopediyasi. M. 1998. 496 p.
   
10. 
    Dorivor o'simliklar. Malumot uchun qo'llanma(N. I. Grinkevich tomonidan tahrirlangan). M." Oliy maktab " 1991. 396 p.
    
11. 
    . Peshkova gi, Shreter Ai uy kosmetikasi va dermatologiyada o'simliklar. Katalog. Ko'kdan. 2001.
    
12. 
    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/
    

MUNDARIJA
KIRISH
Mavzuning dolzarbligi…………………………………………………..…………3
Maqsadi vazifalari…………………………………………………..…………..…3
Adabiyotlar sharhi…………………………………………………….…………..4
I-BOB. RHAPONTICUM CARTHAMOIDES TURKUMI SISTEMATIKASI
1.1 Maxsarsimon lavzeya (Rhaponticum carthamoides) botanik tavsifi……….…5
1.2. Maxsarsimon lavzeya (Rhaponticum carthamoides) o’simligining tarqalishi va morfologiyasi………………………………………………………………………6
II-BOB RHAPONTICUM CARTHAMOIDES TURKUMINING AMALIY AHAMIYATI
2.1. Maxsarsimon lavzeya (Rhaponticum carthamoides) o’stirish texnalogiyasi…7
2.2. Maxsarsimon lavzeya (Rhaponticum carthamoides) amaliy ahamiyati…….…8
2.3. Maxsarsimon lavzeya (Rhaponticum carthamoides) dorivorlik xususiyati……9
III-BOB. RHAPONTICUM CARTHAMOIDES O’SIMLIGINING ILDIZ EKSTRAKTI USTIDA O’TKAZILGAN TAJRIBLALAR
3.1 Rhaponticum carthamoides tukli ildizlaridan ajratilgan genomik DNKning PCR tahlili………………………………………………………………………………13
IV-XULOSA Xulosa………………………………………………………………….………….23
Foydalanilgan adabiyotlar…………………………………………………………25