|
Аминотрансферазлар вауларни аникдаш усуллари
Аминотрансферазлар (АлАТ и АсАТ) - булар амин гурухларини моле- кулалар орасида ташилишини таъминловчи ферментлардир. Иккала фермент одам организм тукималарида кенг таркалган. АеАТнинг энг бой манбалари юрак, жигар, мушаклар, асаб тукимаси, буйрак, талок, упка. АлАТ купгина аъзолар хужайралари цитоплазмасида булади: жигар, буйрак, миокард, ошкозон ости бези.
1.1. АлАТ (аланинаминотрапсфераз)ни аник/шш.
АлАТ ни АНЩЛАШ УЧУН ДАСТУР ТУЗИШ
Экрандаги ёзув:
|
Бошкариш тугмалари
|
Маълумотларни кири- тиш
|
Ахборот манбаи
|
Усул номи
|
1 ёки Ттугмаларни босиш билан тест номи терилади
|
ALT
|
|
Реакция тури
|
—> ёки <— тугмалари билан керакли режим тан- ланади
|
Кинетика
|
Тупламдаги кулланма
|
Ноль
|
|
0 сувга карши
|
|
Улчое бирлиги
|
|
Е/л
|
|
\apopam Калибровка О мил
|
Клавиатура ёрдамида
|
37°С К буйича 1746
|
|
Намуна х;ажми
|
терилади
|
5,0 мкл
|
|
Реагент 1 х;ажми
|
|
500 мкл
|
|
Реагент 2 х;ажми
|
|
0
|
-«-
|
Фильтр 1
|
—> ёки <— тугмалари билан керакли режим тан- ланади
|
340
|
-«-
|
Фильтр 2 Инкубация вак,ти
|
-«-
Клавиатура ёрдамида
|
60 сек
|
|
Реакция вацти
|
терилади
-«-
|
30 сек
|
|
Меъёр:
Макс.
|
Клавиатура ёрдамида терилади
|
40Е/л
|
|
Мин.
|
|
0
|
|
Чизик/гилик
Макс.ютилиш Мин. ютилиш
|
|
2.250
0.800
|
-«-
|
Ютилишнинг
|
|
0.350
|
|
макс.дельтаси
|
|
|
|
ПРИНЦИП:
|
L-аланин + а-кетоглютарат > пируват + L-глютамат
LDH
пируват + NADH+ + Н+ > L-лактат + NADT
|
РЕАГЕНТЛАР:
|
R1: Трис буфер 80 ммоль/л L - аланин 500 ммоль/л R2: ЛДГ 2000 Ед/л NADH 0,18 ммоль/л
R3: а-Кетоглютарат 15 ммоль/л
|
ИШЧИ РЕАГЕНТ ТАЙЁРЛАШ:
|
R1 буфер хджми R2 флакондагига мос эритилади. Эхтиёткорлик билан эригунча аралаштирилади.
|
ИШЧИ РЕАГЕНТ СТАБИЛЛИГИ:
|
2 - 8 °С хдроратда 30 кун. Хона хдроратида 24 соат.
|
ТЕКШИРУВ УЧУН МАТЕРИАЛ:
|
Гемолизсиз зардоб, ЭДТА ёки гепарин билан плазма.
|
УЛЧАШ ШАРТЛА- РИ:
|
Тулкин узунлиги 340 нм Х,арорат 37° С Кювета (опт. йул узунлиги) 1,0 см Ноль Дистилланган сув ёки хдво
|
АНИКЛАШ ИУЛИ:
|
1. Кюветага солинади:
Ишчи реагент 0.5 мл (1 мл) Намуна 50 мкл П00 мкл)
|
Аралаштирилади, 37 °С хароратда 3 мин инкубация килинади
Сунгра кюветага:
R3 50 мкл (100 мкл)
|
Аралаштирилади ва 37 °С хдроратда 1 мин. Инкубация килгандан сунг оптик зичликнинг узгариш тезлиги улчанади. К^авс ичида стандарт кювета учун намуна ва реагентлар микдори курсатилган.
Асбобда улчаш.
|
ХИСОБЛАШ:
|
AJ1T, Е/л = ДА/мин х 1905 340 нм булганда Е/л = ДА/мин х 3543 366 нм булганда
|
ЧИЗИКЛИЛИК:
|
300 Е/л гача. Жуда юкори концентрацияда намунани физ.эритма ёрдамида 1:4 ёки 1:9 нисбатда суюлтиринг, аниклаш жараёни кайтарилади, натижапарни эса 5 ёки 10 га купайтиринг.
|
МЕЪЕРИИ
КУРСАТКИЧЛАР
|
40 Е/л гача.
Х,ар бир лаборатория меъёрий курсаткичлар диапазонини узи коррекция килиши тавсия этилади.
|
ЭСЛАТМА: 1. Бундан ташкари AJIT активлиги куйидагича аникланиш мумкин. Бунинг учун ишчи реактивга R3 эритмаси 10:1 нисбатда кушилади. Хосил булган монореагент 2-^8°Сда 5 кун давомида сакланиши мумкин. Ишлатиш олдидан реагент 37°С гача иситилади.
Х,исоблаш: AJIT, Е/л = ДА/мин х 1746.
2. AJ1T фаоллигини фермент фаоллиги аник булган калибратор буйича калибровка тузиб аниклаш мумкин, аниклаш тугрилиги назорат зардоблари ёрдамида текширилиши шарт.
|
Цон зардобидаги аминотрансаминазалар фаоллигининг аникдашнинг клиник-диагностик ах^амияти: аминотрансферазалар фаолли- гини аниклаш жигар касалликлари диагностикаси учун кулпанилади. АлАТ
фаоллиги юкори курсаткичлари уткир гепатитлар (шу жумладан, виру ели) эрта даврларидан бошлаб (сариклик пайдо булгунча) аникланади. Шунинг учун АлАТ фаоллигини аниклаш беморлар билан мулокотда булган одам- ларда аниклаш тавсия этилади.
Ферментлар фаоллигини нисбатан ошиши пароксизмал тахикардия, гипертоник кризли беморларда кузатилади. АлАТ фаоллигини ошиши турли этиологияли жигар хужайраларининг некрозида, мушакларнинг кучли трав- маларида, миозит, миокардитларда кузатилади.
1.2. МОЧЕВИНАНИАНИКДЛШ
МОЧЕВИНАНИ АНИКЛАШ УЧУН ДАСТУР ТУЗИШ
Экрандаги ёзув:
|
Бошкариш тугмалари
|
Курсаткичларни
киритиш
|
Ахборот манбаи
|
Усул номи
|
i ёки Т тугмаларни
|
UREA
|
|
|
босиш билан хдрф
|
•'А
|
|
|
танланади.
|
|
|
Реакция тури
|
—> ёки <— тугмалари
|
Белгиланган вакт
|
Тупламдаги
|
|
билан керакли режим
|
|
кулланма
|
|
танланади
|
|
|
Ноль
|
|
0 сувга карши
|
|
Улчов бирлиги
|
|
mmol/1
|
|
Х,арорат
|
|
37°С
|
|
Калибровка
|
|
Стандарт буйича
|
|
Стандарт концен-
|
Клавиатура ёрдамида
|
|
Стандарт флакони-
|
трацияси:
|
терилади
|
|
да курсатилган.
|
Проба х;ажми
|
|
5,0 мкл
|
Тупламдаги
|
|
|
|
кулланма
|
|
Do'stlaringiz bilan baham: |
