Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

ПОИСК ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЙ ДЛЯ НАРАБОТКИ 
ИНТЕРФЕРОНА-АЛЬФА2b ЧЕЛОВЕКА В РАСТЕНИЯХ 
NICOTIANA BENTHAMIANA
Мальченкова А.А., студ., Коноплина К.М., м.н.с.
НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина,
Москва, Россия
Научный руководитель: Кособокова Е. Н., к.б.н.
Введение. 
На сегодняшний день растение 
Nicotiana benthamiana
— 
перспективная платформа для накопления сложных рекомбинант-
ных белков. Для разработки технологии получения в растениях
N. Benthamiana
интерферона-альфа2b человека (ИФН) были взяты 
и оптимизированы условия протокола, успешно применяемого для 
наработки иммуноцитокина на основе ИФН и антитела против опу-
холевого антигена HER2 в листьях растения.
Цель работы.
Провести скрининг условий инфильтрации 
Nicotiana benthamiana
для оптимизации условий наработки ИФН
и увеличения выхода целевого белка в листьях растения. 
Материалы и методы.
Изучалось влияние на выход ИФН по от-
дельности таких факторов, как: химические добавки (ХД), оптиче-
ская плотность (ОП) бактериальной культуры A. Tumefaciens (БК), 
несущей плазмиду с геном, кодирующим ИФН, а также тип супрес-
сора посттранскрипционного сайленсинга (СПС), закодированно-
го на плазмиде, которой трансфицированы агробактерии. Влияние 
указанных факторов и двухфакторных взаимодействий на продук-
цию ИФН исследовали методом статистического планирования экс-
перимента. Накопление ИФН в экстракте листьев определяли мето-
дом ИФА.
Результаты. 
Было установлено, что взятые за основу условия 
наработки не способствовали максимальному накоплению ИФН
в листьях. Установлено, что значимыми факторами в диапазоне ис-
следуемых значений являются: тип СПС, ОП БК, несущей плазмиду 
с геном ИФН, концентрация ацетосирингона (AcS), повидона (PVD), 
липоевой (LA) и аскорбиновой кислоты (AA). Добавление в смесь 
AcS, AA, PVD, белка р19 (в качестве СПС) и увеличение ОП БК, не-

---

732
ФАРМАКОЛОГИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ, ФАРМАЦЕВТИКА, ТОКСИКОЛОГИЯ
сущей плазмиду с геном с ИФН, повышало, а применение LA — сни-
жало выход ИФН. В регрессионной модели с двухфакторными вза-
имодействиями был выявлен достоверный положительный эффект 
на выход ИФН от взаимодействия AcS и AA, достоверный отрица-
тельный эффект — от взаимодействия AA и LA.
Выводы. 
Анализ описанных закономерностей позволил подо-
брать условия для инфильтрации растений, обеспечивающие повы-
шение выхода целевого продукта из листьев с 34 до 119 мкг/г. Для 
достижения максимального уровня экспрессии ИФН подобран оп-
тимальный состав раствора для инфильтрации: 400 мкМ AcS, 0,5 г/л 
PVD, 5 мкМ LA, 1 мМ AA, ОП БК, несущей плазмиду с геном ИФН = 
0,1-0,2 е.о.п., ОП БК, несущей плазмиду с геном белка р19 = 0,1 е.о.п. 
Данный вариант состава смеси был выбран для дальнейшей работы 
над увеличением выхода ИФН в листьях растений. 

---

ФАРМАКОЛОГИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ, ФАРМАЦЕВТИКА, ТОКСИКОЛОГИЯ
733