Xxiv международная медико-биологическая конференция молодых исследователей Фундаментальная наука и клиническая

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТОДОВ 
ОПТИЧЕСКОЙ И КОНФОКАЛЬНОЙ МИКРОСКОПИИ 
ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ МЕЛАНОМНЫХ КЛЕТОК 
В КРОВИ ПАЦИЕНТОВ
Дмитриенко Е.А., студ. 
Саратовский национальный исследовательский государственный 
университет им. Н.Г. Чернышевского,
Саратовский государственный медицинский 
университет им. В.И. Разумовского,
Саратов, Россия
Научные руководители: Афанасьева Г.А., д.м.н., доц., 
Иноземцева О.А., к.х.н., доц., Браташов Д.Н. к.ф.-м.н., доц.
 
Изучена возможность обнаружения циркулирующих опухоле-
вых клеток (ЦОК) 
in vitro
в крови пациентов с клинически диагно-
стированной меланомой на I и II стадии с использованием оптиче-
ской и конфокальной микроскопии.
Обследованы здоровые добровольцы (6 человек), пациенты с не-
вусом (5 человек) и меланомой I и II стадий (5 человек), средний воз-
раст которых составил 54±0,5 года.
Оптическая микроскопия препаратов, мазков, слайдов цельной 
крови и суспензии лейкоцитов периферической крови осуществля-
лась с использованием оптического микроскопа Olympus IX-71 при 
10, 20, 40, 60 кратном увеличении. Наиболее информативными ока-
зались изображения, полученные при 40 кратном увеличении.
При оптическом исследовании препаратов и слайдов цельной 
крови пациентов, были обнаружены участки затемнения поля зре-
ния без четких границ, а также множественные объекты различной, 
но чаще округлой формы, неоднородной зернистой структуры. Кро-
ме того, в препарате крови имели место «тени», структурно не свя-
занные с форменными элементами, не имеющие четких границ. При 
оптической микроскопии суспензии лейкоцитов подобных объек-
тов не обнаружено.
Конфокальная микроскопия суспензии лейкоцитов перифериче-
ской крови проведена с применением конфокального микроскопа 

---

ОНКОЛОГИЯ, ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ И ИХ БИОМЕДИЦИНСКИЕ ОСНОВЫ
465
Leica TCS SP8 X позволила сканировать изображения меланомных 
клеток в направлении осей x-y-z и просматривать объекты со всех 
сторон.
В качестве маркеров ЦОК при конфокальной микроскопии ис-
пользовались моноклональные мышиные антитела к CD271, RANK, 
CD133 и ABCB5, конъюгированные с FITC (Fluoresceinisothiocyanate) 
и AF488 (Alexa Fluor 488) (позитивная селекция), в качестве марке-
ров лейкоцитов (негативная селекция) использовались антитела
к CD45, конъюгированные с PerCP (Peridininchlorophyll).
Получены конфокальные изображения лейкоцитов (CD45+) хо-
рошего качества во всех пробах, однако опухолевые клетки не были 
детектированы. Полученные результаты позволяют заключить, что 
методы оптической и конфокальной микроскопии имеют ограниче-
ния в информативности при детекции ЦОК в крови 
in vitro
. Огра-
ничения обусловлены малым количеством ЦОК в периферической 
крови на ранней стадии развития меланомы, потерей клеток при 
приготовлении суспензий, структурной, функциональной и анти-
генной неоднородностью ЦОК, которая не позволяет выявить уни-
фицированные критерии детекции их оптических, рецепторных, 
морфологических признаков.
Работа поддержана грантом Правительства РФ № 14.Z50.31.0044, 
авторы благодарны грантодателю за поддержку.

---

ОХРАНА МАТЕРИНСТВА И ДЕТСТВА 
И ЕЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ 

---

ОХРАНА МАТЕРИНСТВА И ДЕТСТВА И ЕЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ
467