Введение. Цель, задачи предмета

Реактивы:

• 
  кислота серная концентрированная,
  
• 
  кислота серная, 0,05 н,
  
• 
  гидроксид натрия, 40%-й раствор,
  
• 
  селеновый катализатор – смесь 50 г сульфата калия, 5 г сульфата меди и 1 г селена,
  
• 
  индикатор Конвея – 0,033 г бромкрезолового зеленого и 0,066 г метилового красного растворяют в 100 мл этанола и тщательно перемешивают,
  
• 
  реактив Конвея – 20 г борной кислоты растворяют в смеси 200 мл этанола и 700 мл дистиллированной воды и добавляют 10 мл индикатора Конвея.
  

Ход анализа
Точную навеску образца (примерно 0,5 г или 1÷5 мл суспензии) помещают в круглодонную специальную колбу (колбу Къельдаля), добавляют на кончике шпателя небольшое количество селенового катализатора, а затем добавляют 5 мл концентрированной серной кислоты, на специальной подставке в наклонном положении помещают на электрическую плитку для сжигания пробы. При полном обесцвечивании раствора сжигание заканчивают, колбу остужают, а ее содержимое количественно переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой. После тщательного перемешивания приступают к отгонке аммиака на аппарате Къельдаля. Одновременно со сжиганием пробы проводится определение концентрации абсолютно сухих веществ (АСВ) в пробе.
Непосредственно перед началом перегонки в приемник (коническую колбу вместимостью 50 мл) вносят 10 мл реактива Конвея. В перегонную колбу вливают 10 мл пробы, несколько капель смешанного индикатора. Как только вся проба сольется внутрь перегонной колбы, в нее добавляют 3÷4 мл 40%-го раствора гидроксида натрия до появления зеленоватого окрашивания индикатора, после чего сразу начинается перегонка. Перегонку прекращают, когда рН на выходе из перегонной колбы становится равным 6÷7 (по индикаторной бумаге).
Содержимое приемной колбы титруется 0,05 н раствором серной кислоты при непрерывном перемешивании.
Содержание общего азота рассчитывают по формуле:
W_N = ,
где W_N – содержание азота в пробе;
V – объем серной кислоты, израсходованной на титрование, мл;
0,05 – концентрация титранта, мг-экв/мл;
14 – количество азота, мг, которое связывает 1 мг-экв серной кислоты;
100 – объем раствора в мерной колбе, мл;
10 – количество раствора, взятого для отгона аммиака, мл;
m – навеска материала, мг.
Количество сырого протеина рассчитывают по формуле:
W_{протеин} = N∙6,25,
где 6,25 – эмпирический коэффициент.
Для определения белкового и небелкового азота поступают следующим образом. Навеску 10÷30 мг заливают 5 мл 7% ТХУ (трихлоруксусная кислота) на холоду. Центрифужные пробирки оставляют на ночь в холодильнике, а затем центрифугируют. Надосадочную жидкость переносят в одну колбу Къельдаля, а осадок с небольшой порцией дистиллированной воды – в другую (белковый азот – в осадке, небелковый – в надосадочной жидкости), далее проводят сжигание и отгонку азота по методу Къельдаля.
Сущность метода заключается в удалении из продукта водорастворимых небелковых азотсодержащих соединений при обработке продукта горячей водой, восстановлении азота оставшихся органических соединений при минерализации продукта серной кислотой до аммиака, титрометрическом определении аммиака и пересчете его количества на содержание белка по Барнштейну.
В химический стакан отвешивают 0,5÷0,2 г продукта, приливают 100 мл кипящей дистиллированной воды. Стакан ставят на нагреватель и кипятят содержимое 2÷3 мин. Затем стакан снимают и, не охлаждая жидкости, приливают 20 мл раствора сернокислой меди, содержимое перемешивают, добавляют 20 мл раствора гидроксида натрия с массовой долей 2,5%, снова перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 1 ч. Отстоявшуюся жидкость декантируют через фильтр, осадок в стакане промывают горячей водой, декантацией сливая промывные воды, через тот же фильтр. Осадок переносят на фильтр и промывают его горячей водой до исчезновения в промывных водах реакции на сульфат-ион, для чего в пробирку отбирают несколько капель промывных вод и добавляют 2÷3 капли раствора хлорида бария; отсутствие помутнения указывает на полноту промывки.
Промытый осадок вместе с фильтром подсушивают на воздухе или в сушильном шкафу при температуре не выше 105÷107^оС и помещают в колбу Кьельдаля. Испытания проводят одним из установленных способов минерализации (метод Къельдаля).