Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Реактивы и оборудование: 
Крахмал (1 %), йод (1 % раствор в 3 % растворе йодида калия), гидро­ ксид 
натрия (10 %), сульфат меди (5 %), дистиллированная вода. Стаканы на 
100 мл, мерные цилиндры на 50 мл, стеклянные воронки, вата, пипетки на 1 и 
2 мл, стеклянные пластинки и палочки, пробирки. 
Ход работы: А.
 
Приготовление препарата амилазы.
 
Рот ополаскивают
 
2–3
 
раза водой. Отмеряют 50 мл дистиллированной воды и ополаскивают ею рот в 
течение 3–5 минут в несколько приемов. Собранную жидкость фильтруют через 
вату и фильтрат используют в качестве источника фермента. 
Б.
 
В две пробирки наливают по
 
2 мл
 
1 %
 
раствора крахмала.
 
В первую про­
 
бирку добавляют 1 мл раствора слюны, во вторую — 1 мл дистиллированной во­ 
ды (контроль). Содержимое пробирок перемешивают и помещают в термостат при 
37 °С. Через одну минуту из каждой пробирки отбирают по 1 капле жидкости и 
смешивают на стеклянной пластинке с каплей йода. Повторяют взятие 
59 

---

проб через каждые 2 минуты и по окраске йодных проб делают вывод о гидро­ 
лизе крахмала. Присутствие в гидролизате мальтозы и глюкозы устанавливают с 
помощью реакции Троммера (или Фелинговым реактивом), в основе которой 
лежит окислительно-восстановительная реакция. В пробирку наливают 1–2 мл 
гидролизата и равный объем 10 % раствора гидроксида натрия. Затем по каплям 
при встряхивании прибавляют 5 % раствор сульфата меди до появления неисче­ 
зающей мути гидроксида меди (II). Осторожно нагревают верхнюю часть со­ 
держимого пробирки, появляется желтое окрашивание, переходящее в красное, 
что указывает на положительную реакцию Троммера. О действии фермента су­ 
дят по исчезновению субстрата или появлению продуктов реакции. 
Действие пепсина (КФ 3.4.23.1) 
Пепсин (класс гидролаза, подкласс пептидаза) ускоряет гидролитическое 
расщепление пептидных связей, образованных карбоксильными группами фе-
нилаланина, лейцина: 
Пепсин — эндопептидаза, т. е. ускоряет гидролиз внутренних пептидных 
связей белка с образованием полипептидов. В активном центре фермента на-
ходятся радикалы­ дикарбоновых кислот. Пепсин содержится в желудочном 
соке животных и человека в неактивной форме (пепсиноген) и активируется в 
присутствии соляной кислоты по механизму аутокаталитического действия 
самого пепсина. Оптимальным­ условием действия пепсина является pH 0,9–
1. Если секреция HCl не обеспечивает­ такой кислотности, гидролиз белков 
резко ухудшается.