Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Ход работы: 
В две пронумерованные пробирки вносят по
 
1 мл
 
0,2 М трис-
НСl буфера (pH 8,0) и по 1 мл 1 % раствора казеина. В одну пробирку 
прилива­ ют 1 мл 0,025 % раствора трипсина, в другую — 1 мл 
инактивированного раствора­ трипсина (заранее прокипяченного не менее 
часа). Растворы хорошо перемешивают и тотчас берут из каждой пробирки по 
0,5 мл содержимого в две тщательно вымытые пробирки. 
Оставшиеся опытную и контрольную пробы помещают в термостат (38 °С) на 
2 часа, отбирая из них аликвоты по 0,5 мл через 30, 60, 90, 120 минут. 
В отобранных аликвотах проводят реакцию на наличие свободных α-
аминогрупп, для чего их помещают в кипящую водяную баню на 10 минут. 
Затем­ охлаждают до комнатной температуры, после чего прибавляют по 
0,5 мл дистиллированной воды, 0,5 мл ацетатного буфера (pH 5,4) и 0,5 мл 
нингидри-нового реактива. Содержимое пробирок тщательно перемешивают 
и помеща-ют для развития окраски в термостат (95 °С) на 7–10 минут. Затем, 
не вынимая пробирок из термостата, прибавляют в каждую из них по 5 мл 
50 % раствора изопропанола. 
Оптическую плотность опытной пробы измеряют на ФЭКе против контро-
ля при длине волны 507 нм (зеленый светофильтр). 
Полученные результаты выражают графически, откладывая по оси абсцисс 
время инкубации, а по оси ординат значения оптических плотностей. Получен­ 
ная прямая наглядно демонстрирует динамику высвобождения во времени 
свободных­ аминогрупп в процессе гидролиза казеина в присутствии трипсина. 
Вопросы и задания для самопроверки 
1.
Какое место занимает обмен белков в метаболизме веществ? Почему? 
2.
Под влиянием каких ферментов происходит расщепление белков? 
Назовите класс, подкласс, подподкласс этих ферментов? Дайте 
характеристику от­ дельным представителям. 
3.
Почему протеолитические ферменты находятся в желудочно-кишечном 
тракте в виде зимогенов? Каким образом происходит их активирование? 
Что такое аутокатализ? 
4.
Какие ферменты ускоряют гидролиз внутренних пептидных связей белка? 
Дайте краткую характеристику отдельным представителям этого подкласса. 
5.
Какие пептидные связи гидролитически расщепляются при участии химо-
трипсина? Опишите механизм действия химотрипсина. 
6.
Укажите, каким образом действует химотрипсин на пептид: лей–тир–цис– 
фен–лиз–ала–три–арг–цис–фен–глу–ала–лей–иле. 
46 

---

7.
Укажите, каким образом действует пепсин на пептид: лиз–ала–гли–асп– 
фен–гли–асп–ала–фен–глу–сер–арг–фен–ала–ада–гли. 
8.
Какие пептиды образуются при обработке трипсином приведенного ниже 
пептида: вал–лиз–глу–мет–арг–цис–глу–лиз–фен–вал–арг–иле–про–гли– 
лиз–сер–гли–тре? 
9.
Укажите, каким образом действуют карбоксипептидаза и аминопептидаза 
на пептид: ала–вал–гли–сер. К какому подклассу пептидаз они относятся? 
10.
Где локализованы дипептидазы? Какие из них хорошо изучены? В чем от­ 
личие пролил-дипептидазы и пролиндипептидазы? Напишите уравнения 
реакций гидролиза при участии этих ферментов. 
11.
Какие пищевые белки являются наиболее ценными для организма челове-
ка? Почему? 
12.
Может ли вегетарианская диета привести к отрицательному азотистому 
балансу? 
13.
Каковы потребности детей школьного возраста в пищевом белке?