Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия» /Л. А. Ганеева, Л. И. Зайнуллин

Работа 3. Количественное определение общего белка 
сыворотки крови по биуретовой реакции 
Белки сыворотки крови при взаимодействии с сернокислой медью в 
щелочной среде образуют за счет своих пептидных связей комплексные 
соединения с ионами меди фиолетового цвета. Интенсивность окрашивания 
раствора находится в прямой зависимости от концентрации в нем белка. 
Реактивы и оборудование: 
Сыворотка крови; биуретовый реактив, рабочий раствор, приготовлен-
ный из основного раствора; хлористый натрий, 0,9 % раствор, стандарт-
ный раствор альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки), 10 % в 0,9 % 
растворе хлористого натрия. 1 мл раствора содержит 0,1 г белка. Микро­ 
пипетки, пипетки емкостью 1 мл с делениями и 5 мл, фотоэлектроколори-
метр, штатив с пробирками. 
Ход работы: 
К
 
0,1 мл сыворотки крови прибавляют
 
5,0 мл рабочего 
раство-ра биуретового реактива, смешивают, избегая образования пены. Через 
30 ми-нут (и не позднее, чем через час) измеряют оптическую плотность 
раствора на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волн 540–560 нм 
(зеленый светофильтр) против контроля. Одновременно ставят контроль. К 
0,1 мл 0,9 % раствора хлористого натрия прибавляют 5 мл рабочего 
биуретового реактива. Далее обрабатывают как опыт. Контроль производят в 
двух пробирках. Перед фотометрированием жидкость из обеих пробирок 
смешивают и разливают на две кюветы. Расчет ведут по калибровочному 
графику. Для его построения из стандартного 10 % раствора альбумина 
готовят рабочие стандартные растворы, как указано в таблице 3. 
25 

---

Таблица 3. Состав смесей для построения калибровочного графика 
№№ Стандартный раствор 
0,9 % раствор 
Содержание 
Концентрация белка 
п/п 
белка (мл) 
хлористого натрия (мл) 
белка в пробе (г) 
(%) 
1 
0,4 
0,6 
0,04 
4 
2 
0,6 
0,4 
0,06 
6 
3 
0,8 
0,2 
0,08 
8 
4 
1,0 
— 
0,10 
10 
Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 
5 мл рабочего биуретового реактива; через 30–60 минут измеряют оптическую 
плотность на ФЭКе, как в опыте, против контроля. По полученным данным 
строят калибровочный график. Норма — 6,5–8,5 % белка. 
Примечание
.
 
Содержание белка в стандартном растворе должно быть не
 
меньше 7 %. При содержании белка в сыворотке больше 10 % сыворотку раз-
водят физиологическим раствором, а результаты умножают на коэффициент 
разведения.