Глава 2. Методология химико-токсикологического анализа
____________________________________________________________________________
хроматографические методы – колоночную адсорбционную,
тонкослойную и бумажную хроматографию. В последних двух случаях
после высушивания пластин или хроматографической бумаги
определяют зоны, в которых находятся анализируемые вещества, и
элюируют их специально подобранным органическим полярным
растворителем. При использовании колоночной хроматографии один
из таких растворителей применяют для элюирования веществ из
колонки, собирают нужные фракции и, если необходимо,
концентрируют элюат в вакууме.
При обработке проб мочи необходимо учитывать, что
некоторые патологические процессы приводят к значительным
количественным и качественным изменениям мочи. Может
образоваться очень мало мочи и содержание солей, мочевины и других
веществ в ней может быть очень высоким. При некоторых
заболеваниях или при приеме диуретиков, напротив, суточный объем
мочи может значительно возрасти и поэтому концентрация
определяемых веществ будет низкой, что приводит к необходимости
дополнительного концентрирования. В моче больных может
содержаться кровь, различные бактерии (бактериурия), белки, может
резко повышаться содержание билирубина, порфиринов, что
значительно изменяет оптические свойства мочи, это необходимо
учитывать при использовании спектрометрических методов.
Наличие бактерий в биологическом материале (или попадание
их извне в пробу) создает дополнительные сложности при сборе и
хранении проб. В присутствии бактерий в пробах происходит ряд
биохимических процессов: гидролиз мочевины с образование аммиака,
трансформация глюкозы, расщепление белков, изменение рН,
возможны также процессы химической трансформации определяемых
веществ – гидролиз, окислительно-восстановительные процессы и др.
Для предупреждения этих процессов к пробе добавляют различные
вещества: толуол, хлороформ, борную кислоту, тимол. Естественно,
что всякие добавки могут быть не безразличны для последующего
анализа, и их влияние должно быть тщательно проверено
контрольными опытами. Целесообразно собирать пробы в стерильные
сосуды и хранить их в условиях, затрудняющих бактериальное
загрязнение. В общем случае образцы при необходимости лучше
хранить в замороженном виде в низкотемпературной холодильной
камере (-10–20
). Близким к идеальным условиям длительного
хранения является хранение образцов после лиофилизации в запаянных
ампулах, заполненных инертным газом (азот, гелий, аргон и др.).
Анализ органов и тканей требует предварительной обработки с
целью разрушения целостности тканей и клеточных структур.
Гомогенизация
(измельчение)
производится
с
помощью
46
Do'stlaringiz bilan baham: |